四川省松茸系统发育及挥发性成分分析探究.pdfVIP

2016(1) 龟闷萄 四川省松茸系统发育及挥发性成分分析 王盼盼1 侯怡铃1 王 梅2、朱远秀1朱洪庆1 张 楠1 伏 雷1 李育明2 丁 祥” (1西华师范大学生命科学学院／西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充637009；2南充市农业科学研究院， 四川南充637001) 摘 要运用分子生物学方法结合气相色谱与质谱联用技术 从分子水平来研究其在进化上的亲缘关系。 分析西南地区不同产地松茸资源，为其系统分类提供依据。采 transc曲ed 真菌核糖体基因转录间隔区(Intemal spacer， 集了四川省理塘县、马尔康县和小金县的松茸子实体，对其进 行了ITS序列多样性研究。应用特异引物进行PCR扩增，并对 转录间隔区1(ITsl)、5．8srDNA和内转录间隔区2(ITS2)，头 扩增产物进行测序。从GenBank数据库中下载已知的松茸序 尾串联成一个重复单位，其长度一般为650～750bp，其结构 列，并与实验样品的序列进行BLAsT比对，利用MEGA5．0和 Clustalxl．83软件采用NJ法构建进化树。用石油醚蒸馏萃取松 和ITs5三对引物可以用于大多数担子菌和子囊菌的特异性 茸挥发油，并使用气相色谱一质谱联用分析挥发组分。试验采集 鉴定引物。 的理塘县松茸样品与小金县松茸样品具有较高的同源性，高达 97．90％；试验室采集的马尔康县松茸样品与小金和理塘的松茸 差异性最大，亲缘关系较远；且马尔康县松茸样品的ITsl和ITS2 图1 ITS序列结构示意图 区均存在较多的碱基突变现象。挥发组分主要是酯类，且小金县 松茸样品挥发油中的组分种类明显较其它两个地方松茸多。 rDNA上的5．8s、18S和28SrDNA存在着广泛的异种同 关键词松茸遗传多样性气相色谱一质谱联用 源性。而由于ITs序列不加入成熟核糖体，所以ITs序列在 文章编号1000一8357(2016)01一0019一05 进化过程中承受的自然选择压力非常小，因此能容忍更多 的变异，成为ITS序列在真菌种类鉴定及其进化分析的理论 松茸(舭^o如mnma如“to船)，又称松口蘑，是一种名贵的 野生食药用真菌，富含蛋白质、不饱和脂肪酸、多种氨基酸以 基础罔。 及核酸衍生物，具有提高SOD活性和加速自由基清除的功 研究对采集于四川省小金、马尔康、理塘3个地区的松茸 能，可以增加免疫力和提高人体抗癌能力，具有很高的药用 价值，被誉为“菌中之王”。松茸广泛分布于黑龙江、吉林、台 technology 湾、四川、云南、西藏等地u-。四川松茸主要分布在甘孜藏族 达到对四川省不同地区的松茸的鉴定，同时也是从分子水平 自治州的康定、理塘、巴塘、九龙、稻城、乡城、雅江、丹巴、道 上研究采取的松茸样品在进化上的亲缘关系，这种将传统的 孚、新龙等多个县；阿坝藏族羌族自治州的马尔康、小金、金 形态学鉴定与现代分子生物学技术相结合，为进一步开发松 川、壤塘等县以及凉山彝族自治州的德昌、会理、会东等 茸提供了理论依据。 县。1。鉴于理塘离西藏较近，属四川西南部，马尔康偏四川西 1材料与方法 北部，而小金则比较偏中部，且理塘松茸、马尔康松茸和小金 松茸共生的植被不同，所以这三个地区的松茸在研究生态及 1．1材料与试剂松茸样品采集于理塘、马尔康和小金县， 其发育关系方面具有一定的代表性