h5n1高致病性禽流感病毒ha基因在昆虫细胞中的表达-江苏农业科学.pdfVIP

— ２４— 江苏农业科学　２０１４年第４２卷第７期 申慧芳，申惠敏，贾秀珍，等．Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感病毒ＨＡ基因在昆虫细胞中的表达及免疫原性［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（７）：２４－２７． Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感病毒ＨＡ基因 在昆虫细胞中的表达及免疫原性 １ ２ ３ １ 申慧芳 ，申惠敏 ，贾秀珍 ，张青峰 （１．遵义医学院珠海校区，广东珠海５１９０４１；２．山西省长治市畜牧兽医局，山西长治０４６０００； ３．山西省长治市城区农林委员会，山西长治０４６０００） 　　摘要：用昆虫杆状病毒表达系统表达了高致病性禽流感Ｈ５Ｎ１ＨＡ蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测，ＨＡ 蛋白表达分子量约为７０ｋｕ；将ＨＡ蛋白制成油乳液，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫３次后，收集血清，以血凝抑制试验（ＨＩ） 和血清ＩｇＧ抗体酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）评估体液免疫，酶联免疫斑点试验（ＥＬＩＳＰＯＴ）评估细胞免疫。试验结果表 明：重组ＨＡ蛋白组和全病毒灭活疫苗组免疫小鼠后，血清中和抗体效价及ＥＬＩＳＡＩｇＧ效价均显著高于ＰＢＳ组，重组 ＨＡ蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显著。ＥＬＩＳＰＯＴ试验数据显示，重组ＨＡ蛋白组和全病毒灭活疫苗组小鼠 脾单个核细胞分泌ＩＦＮ－ 和ＩＬ－４细胞数量显著高于ＰＢＳ组，而重组ＨＡ蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显 γ 著。用昆虫杆状病毒表达系统表达Ｈ５Ｎ１ＨＡ蛋白制成油乳液能诱导体液免疫和细胞免疫，能为预防高致病性禽流感 Ｈ５Ｎ１候选疫苗的筛选提供依据。 　　关键词：Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感；Ｓｆ９昆虫细胞；ＨＡ蛋白；免疫反应 　　中图分类号：Ｓ８５５．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）０７－００２４－０４ 　　禽流感（ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａ）是由禽流感病毒（ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａ 的一大灾难性疾病，不仅给养禽业带来了巨大的经济损失；同 ｖｉｒｕｓ，ＡＩＶ）引起的一种禽类传染病，其中高致病性禽流感 时，它正在突破种间屏障，引起人类感染，从病禽直接感染人 ［１］ （ｈｉｇｈｐａｔｈｏｇｅｎｉｃａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａ，ＨＰＡＩ）Ｈ５Ｎ１亚型更是养禽业 类病死率高达６０％ ，给公共卫生带来威胁。可通过减少禽 对禽的传播以及禽对人类的传播，并进行有效的免疫来保护 收稿日期：２０１４－０３－１４ ［２］ 养禽业的健康发展 。预防Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感的传统疫 基金项目：国家自然科学基金（编号；广东省深圳市科技 苗是由鸡胚生产的。然而这种方法生产疫苗存在很大的风 研发资金基础研究计划（编号：ＪＣ２０１１０５２０１０２８Ａ）。 ［３］ 险，如由于病毒致死鸡胚而影响疫苗生产 。另外，高致病 作者简介：申慧芳（１９７６—），女，山西长治人，博士，副教授，主要从事 ［４］ 性禽流感的疫苗生产和处理需要生物安全三级实验室 。 食品安全生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｅｔｈｅｒｓｈｅｎ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ。 因此，寻找一种可以替代传统疫苗而又高效安全的疫苗就成 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 ［２３］王　凯，朱教君，于立忠，等．