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绿色荧光蛋白基因在大肠杆菌中的表达与检测（Expression and detection of fluorescent protein gene in E.coli） 周五（单周）组员：马瑞欣（20131241151）李明阳（2013141241111） 获取目的基因片段 设计引物从pEGFP-N3质粒中获取EGFP基因 引入EcoRⅠ酶切位点的上游引物 ( 5’-GGAG / AATTCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAG-3’) 引 入Hind Ⅲ酶切位点的下游引物 ( 5’-CCGA / AGCTTGGCTGATTATGATCTAGAGTC-3’) 图1.pEGFP-N3质粒结构示意图 以EGFP片段为模板进行PCR扩增 （步骤一和步骤二同时进行，方法如下） 先将模板适当稀释，根据需求自主设计加入各组分后，分别取模板、上游和下游引物、Taq酶（5u/ul）、双蒸水、10× Buffer、dNTP作为 PCR反应体系，轻弹混匀加入的液体，快速离心集液于管底。将制备好的PCR体系放入PCR仪，进行PCR反应。 以下为PCR反应体系： 编号 组分 加量（ul） 1 双蒸水 13.2 2 10×Buffer 2.0 3 dNTP 1.6 4 上游引物M13F（10uM） 1 5 下游引物M13R（10uM） 1 6 模板（1-10ng/ul） EcoRⅠ酶+Hind Ⅲ酶+