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玉米CMS-C育性恢复特异片段鉴定分析 答辩人：徐魏 指导老师：曹墨菊（教授） 前言 根据恢复专效性分类 前言 前言 前言 玉米CMS恢复基因研究进展 玉米的CMS-C的育性恢复机理比较复杂 前言 恢复基因对转录本的影响有两个方面，一方面恢复基因改变CMS相关基因的转录模式，CMS育性得到恢复。另一方面，恢复基因可通过抑制CMS相关基因的转录，降低转录本，从而使CMS育性得到恢复。影响CMS相关基因的转录本的加工、编辑和翻译，核基因改变与CMS相关基因的表达，可能与这些基因的转录加工有关。 玉米CMS恢复基因研究进展 研究目的和意义 由此本课题组推测育性恢复的后代F1（C黄早四×自330）、（C48-2×18-599白）、（C478×自330）中核-核，核质互作产生的特异条带可能与C胞质的育性恢复相关。 以前实验表明对同质异核材料进行DNA水平上的遗传差异分析 可育组合 不可育组合 亲本 研究目的和意义 本次实验目的在于对以上现象等进行重复性验证分析 通过此次实验对CMS-C的败育机理和不同的遗传背景的恢复机理的进一步了解和鉴定分析，所得出的结论也会为玉米CMS-C在生产上的应用和推广提供参考依据。 材料与方法 不育系：C黄早四、C48-2、C478；测验系：18-599白、自330、A619、凤可1、广10-2；以及不育系与测验系的杂交F1代等。 材料： 材料与方法 将上述材料播种于四川农业大学温江实验基地。分两期播种，中间间隔两周，每种材料每期播种4行，行距80cm，一行7穴，一穴2株。 同时在实验室进行发苗处理。   材料的种植： 材料与方法 育性鉴定:分为田间育性鉴定和室内镜检，花粉粒可染率=可染花粉数÷总花粉数×100% DNA的提取和检测: 采用植株的鲜嫩叶片，参照四川农大玉米研究所改良的2×CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法提取基因组DNA SSR扩增:实验选用分布于玉米染色体上的SSR引物s106，AC204515.3-10，对不育系、测验系以及不育系测交后代进行SSR分析 SSR扩增产物—特异条带的回收:SSR扩增产物的回收，按产物的回收试剂盒说明进行回收，试剂盒使用前向15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇 连接、转化、重组子筛选及测序 步骤： 预期效果  用SSR分子标记的扩增发现同质异核材料之间的差异，并对该差异片段进行生物学分析证明它与育性恢复有关。 若不同材料之间的可育组合均出现了略大于亲本的特异条带，则实验将进一步对该特异条带进行回收，测序，并对其进行同源性比对，预测基因的可能功能，并进一步证明该特异条带与玉米的CMS-C败育机理和育性恢复机理有关。 时间安排 2012年四月完成开题报告。 2012年4月进行田间育苗，同时进行室内发苗，育苗。 2012年5月进行所有材料叶片总DNA的SSR分析。 2012年8月对不育系和保持系以及不育系的测交后代F1组合的小孢子发育四分体和单核时期进行SSR分析等。 2012年10月份进行结果比对分析，并开始着手整理资料和所得结果，进行毕业论文的撰写和完善。 2013年3月份将论文上交指导老师，并做进一步完善，准备论文答辩。     奇诺制作坊 Lovershy QQ: 308834492 Think something new O(∩_∩)O谢谢欣赏