rainbow跟uv beads演示质控(qc)跟软件操作练习(三根激光).docVIP

Rainbow beads演示质控（QC）和Diva软件操作练习 仪器质量控制（QC）可监测一定时间内仪器状态的稳定性。下面将介绍如何运行质控微球，调整光电倍增管（PMT）的电压，从而追踪一定时间内PMT电压的波动，以及如何确认激光延迟时间和面积因子。分析30-60次QC数据以判断其趋势。在做仪器QC的时候，尽可能保证多参数的稳定性。比如，尽量使用同一种微球，同样的批号，同样的鞘液压力和同样的样本流速。如果需要改变鞘液压力，那么您可以考虑在每一种压力条件下，单独建立一个“Experiment (实验)”。 1、样本制备（2管）： 向1ml鞘液中加入2滴混合均匀的Rainbow荧光微球（BD Pharmingen Cat. No.556291）；——检测488nm蓝色激光和633nm红色激光 向另一管1ml鞘液中加入2滴混合均匀的UV荧光微球（BDIS Cat. No. 344669）； ——检测407nm紫色激光 上机检测前充分混匀微球。 在“浏览器（browser）”里建文件夹（QC）和实验组（beads），样本（日期），2个采集管（Rainbow和Violet），并重命名（选中后，点右键Rename重命名），将“通用工作页面（Global sheet）”命名为Rainbow，再添加一个“通用工作页面（Violet）”。 选择InstrumentInstrument Configuration，确保当前的仪器设置包含合适的参数，选择FACSAria Class。 将“浏览器”的采集箭头选中采集管，点击“仪器框（instrument）”的“参数（parameter）”页面。 除FSC、SSC散射光参数外，删除不必要的荧光参数，保留以下三个荧光参数： ① FITC；——检查488nm激光； ② APC；——检查633nm激光； ③ DAPI；——检查407nm激光。 所有参数均选择线性，所有参数均选A面积信号，FSC和荧光参数还需选择H高度信号。 在“通用工作页面Rainbow”上建获取模板： ① 一共画8个图：第一个为双参数散点图（Dot Plot），后7个为单参数直方图（histogram）。选中工作页面工具栏中的绘图工具，在空白页面上单击，即出现相应图形，再调整大小。 ② 第一个图，横轴FSC-A，纵轴SSC-A，在横轴和纵轴均100,000左右位置，设单个微球的矩形门（rectangle gate）P（Parent）1； ③ 点击Ctrl，一起选中后七个图，单击右键，选择“Show Population（细胞群体级别图）”中的P1，即后七个图仅显示P1门内颗粒； 右键单击任何一张图，选择“Show Population Hierarchy（显示细胞群体级别）”，出现该图，以明确层层包含的细胞归属级别。 当一个“门”设置完毕之后，可以手动改变其内细胞群体的颜色。双击“细胞群体级别图”上的颜色盒，从菜单中选择新颜色。 ④ 第二个图，横轴FSC-A，在横轴100,000左右位置，做间隔门（interval gate）P2； 第三个图，横轴FSC-H，在横轴100,000左右位置，做间隔门P3； 第四个图，横轴SSC-A，在横轴100,000附近，做间隔门P4； 第五个图，横轴FITC-A，在横轴100,000附近，做间隔门P5； 第六个图，横轴FITC-H，在横轴100,000附近，做间隔门P6； 第七个图，横轴APC-A，在横轴100,000附近，做间隔门P7； 第八个图，横轴APC-H，在横轴100,000附近，做间隔门P8。 选择这八个图，单击信息查看窗口内的“Title (标题)”页面，选中“Tube (采集管)”和“Population (细胞群体)”复选框，在这八个图的标题位置均显示此两项。 在细胞群体级别图上，对P1-P8进行重命名（选中，再点一下），例如single beads，FSC-A，SSC-A，FITC-A，FITC-H等。 ⑤ 显示统计图： 右键单击任何一张图，选择“Create Statistics View（显示统计结果）”。 右键单击统计图，选择“Edit Statistics View（编辑统计结果）”。 单击“Edit Statistics View”窗口： ⑴“Header（表头）”页面，选择需要项目。 ⑵“Population（细胞群体）”页面，可以不选择“# Events（细胞数）”和“％Parent（%母细胞群体，即门内细胞群体）”。因细胞群体级别图中已显示这几项。 ⑶“Statistics (统计)” 页面，仅选择所有实验涉及到的参数的“Mean (平均值)”选项。 在“通用工作页