贵阳地区42株红色毛癣菌临床菌株的生物学特性及其表型与临床相关性研究-皮肤病与性病学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2012 届硕士研究生毕业论文 PAGE PAGE 10 贵阳地区 42 株红色毛癣菌临床菌株的生物学特性及 其表型与临床相关性研究 专业：皮肤病与性病学 研究生：黄玲 导师：魏羽佳教授 宋守荣教授 【摘要】目的：观察贵阳地区42株红色毛癣菌生物学特性；探讨贵阳地区42株红 色毛癣菌临床菌株的表型与感染部位的相关性。方法：①大培养:采用SDA和PDA 培养基, 28℃、35℃温箱培养,测量菌落面积,绘成生长曲线。②小培养(方块法) : 采用SDA、PDA培养,观察镜下菌丝生长、孢子产生情况。③采用真菌通用引物ITS4 和ITS5对红色毛癣菌的核糖体基因的ITS区进行PCR扩增，并进行基因测序。结果： 纳入实验的42株红色毛癣菌共分离出3种表型：绒毛型、沟纹型、粉末型（或颗 粒型）。在相同的培养基上，28℃时菌落生长速度快于35℃（P﹤0.05），在相同 温度时，在SDA培养基菌落生长优于PDA培养基，在28℃菌落生长比较稳定，35℃ 时变异性较大。菌落在SDA培养基上见少量的小分生孢子，偶见大分生孢子。在 PDA培养基产孢较丰富，镜下可见少量大分生孢子、厚壁孢子、结节菌丝。贵阳 地区42株红色毛癣菌在各浅部感染均以绒毛型为首位，绒毛型在手足癣中占比例 最高，粉末型在甲真菌病中所占的比例较高，沟纹型在体股癣中所占比例较高。 42株菌株用形态学方法、生理试验及用ITS4、ITS5基因测序后均为红色毛癣菌。 结论：42株红色毛癣菌临床分离菌株的菌落形态与培养基和培养基温度有关，其 表型与感染部位均有相关性。 关键词：红色毛癣菌 表型 临床相关性 英文缩略词表 英文缩写 英文名称 中文名称 SDA Sabouraud’s dextrose agar 沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂 PDA potato dextrose agar 马铃薯葡萄糖琼脂 T.rubrum Trichophyton rubrum 红色毛癣菌 PCR polymerase chain reation 聚合酶链式反应 RAPD ramdom amplified polymorphic DNA 随机扩增多态性 RFLP restriction fragment length polymorphism 限制性片段长度多态性 ITS internal transcribed spacer region 内转录间隔区 γDNA ribodomal DNA 核糖体 DNA d day 天 min minute 分钟 sec second 秒 前言 皮肤癣菌病（dermatophytosis）是指由皮肤癣菌侵犯人和动物的皮肤、毛 发、指（趾）甲引起的感染，是全世界最常见的浅部真菌病，也是一群寄生性真 菌，感染者达世界人口的 20%-25%[1]。由于各种新技术、重大手术的开展、免疫 缺陷人群的增加、广谱抗生素广泛应用以及人们生活行为方式的改变，在全世界 范围内不仅深部真菌感染率在上升，皮肤癣菌感染的发病率也逐年增高。红色毛 癣菌（Trichpohton rubrum）是一种最常见的亲人性致病性皮肤癣菌[2]，也是我 国最常见的皮肤癣菌，约占 56.4%以上[3]。它主要寄生或腐生于人的皮肤表皮角 质、毛发和甲板的角蛋白组织中，引起手足癣、体股癣、甲真菌病等癣菌病。癣 菌病极为顽固，常出现复发和再感染，严重影响患者生活质量，并易导致过敏性 疾病如癣菌疹。虽然许多学者对红色毛癣菌的生物特性进行了大量的研究，但仍 存在许多的不足和问题。对它的某些生物特征例如：地域生长特点的研究、产孢 培养基的确定等等这些基础问题研究仍不充分。而贵阳地区地理气候环境为真菌 感染提供了优越条件，是真菌病的高发地区，为真菌的调查研究提供了丰富的资 源。 红色毛癣菌是一种非常重要的致病真菌，了解他的生物学特性等为防治红 色毛癣菌引起的癣菌病及为抗真菌药物的开发提供依据。侵袭性真菌感染死亡率 高，药物疗效不佳，是当今研究重点，而红色毛癣菌与部分深部真菌之间在很多 细胞结构和生理过程上具有相似性，对该菌的研究为以后新药物靶标的研制及开 发提供依据。本实验是采用了传统鉴定方法并结合分子生物学的方法鉴定临床菌 株及对贵阳地区 42 株红色毛癣菌临床菌株生物学特性及其表型与临床皮肤癣菌 病感染部位相关性的初步研究，从而为建立贵阳地区真菌数据库提供资料，并为 进一步探讨基因型及表型的关系打下基础，并以此探讨红色毛癣菌是否存在地域 差异性。 1.研究对象 材料与方法 2011 年 3 月至 2011 年 10 月在贵阳医学院附属医院皮肤科门诊就诊的皮肤癣 菌病患者病变处的分离菌株。 1.1 纳入标准： (1)凡有手足癣、体股癣、头癣、甲真菌病中任意一种皮肤癣菌病的皮屑 或者甲屑培养阳性疑似红