含离子液体介质中重组β D 葡萄糖醛酸苷酶催化合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸的研究-生物化工专业论文.docxVIP

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2019-04-05 发布于上海
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含离子液体介质中重组β D 葡萄糖醛酸苷酶催化合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸的研究-生物化工专业论文.docx

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II II 石河子大学硕士学位论文摘要 [BMIM]PF6/缓冲液两相体系中 β-D-葡萄糖醛酸苷酶能高效地催化甘草酸水解生成 GAMG ，其反应初速度和化学键选择性受诸多因素的影响。该催化体系的最适 [BMIM]PF6 浓度、缓冲液 pH、反应温度、底物浓度和振荡速度分别为 40%、6.0、50 ℃、 6 mM 和 200 rpm；在此条件下，反应初速度、GAMG 产率和化学键选择性（Scb）分别达到 3.15 mMh-1, 74.36% 和 98.12%。[BMIM]PF6/缓冲液两相体系中主产物 GAMG 分布在上层缓冲液相，副产物甘草次酸（Glycyrrhetinic Acid, GA）则在下层离子液体相， GAMG 与 GA 达到初步分离的效果。[BMIM]PF6 的重复利用性研究结果表明，循环利用 5 次以后其回收率仍高达 92%以上。另外，[BMIM]PF6/缓冲液两相反应体系中的表观米氏常数 Km 及活化能 Ea 比较低，Vmax 较大，分别为 1.21 mM、25.97 kJmol-1 和 3.14 mMh-1。（ 4 ） [EMIM]BF4/ 缓冲液均相体系中 β-D- 葡萄糖醛酸苷酶的催化特性研究： [EMIM]BF4/缓冲液均相体系中 β-D-葡萄糖醛酸苷酶能够高效地催化甘草酸水解生成 GAMG。经过优化得到该反应体系的最适[EMIM]BF4 浓度、缓冲液 pH、反应温度、底物浓度分别为 11%、5.4、45 ℃和 4 mM。在上述条件下反应 24 h 后，反应初速度、产物 GAMG 产率和化学键选择性分别为 2.76 mMh-1、95.31%和 61.81%。以 11%（v/v） [EMIM]BF4/缓冲液为反应介质，底物存在时 β-D-葡萄糖醛酸苷酶的热稳定性比没有底物存在时要高。与缓冲液反应体系相比，[EMIM]BF4/缓冲液均相体系中 β-D-葡萄糖醛酸苷酶催化甘草酸水解反应的表观米氏常数 Km（0.85 mM）、Vmax（2.22 mMh-1）及活化能 Ea（9.96 kJmol-1）均较低，但 Vmax/Km 值则是缓冲液中的 2.04 倍。本研究表明，在绿色环保的含 IL 介质体系中利用 β-D-葡萄糖醛酸苷酶催化合成 GAMG 时反应速度快、产物收率高、化学选择性强，相关结果对于重要可再生资源甘草的开发利用具有重要意义。关键词：离子液体；β-D-葡萄糖醛酸苷酶；化学键选择性；甘草酸；单葡萄糖醛酸甘草次酸；两相体系；均相体系石河子大学硕士学位论文Abs 石河子大学硕士学位论文 Abstract III III Abstract Glycyrrhizin (GL) is a major component of licorice which is the most important traditional Chinese medicine. Enzymatic modification of glycyrrhizin to glycyrrhetic acid 3-O-mono-β-D-glucuronide (GAMG) with higher bioavailability has important research value and good prospect in application. Ionic liquids (ILs) are a new class of solvents composed of ions，which are liquid at room temperature and can be designed by modification of either the cation or anion. They have good stability, strong solubility and negligible evaporation, etc. It is very important to take the green and ecofriendly ionic liquids as the reaction medium in replace of volatile and toxic traditional solvents. In this thesis we attempt to make a high-effective utilization of recombined enzyme to catalyze GL to GAMG in the presence of ionic liquids. Firstly, the ionic liquids were synthesized and screene