第一章色谱分析法.pptVIP

本章重点： 1. 理解色谱分离的基本原理； 2. 掌握色谱法的基本概念和术语； 3. 掌握色谱法的定性和定量方法; 4. 掌握气相\液相色谱的分析原理、仪器结构 和在食品分析中的应用. 色谱柱：色谱法的核心部件，混合物在此实现分离。 2 色谱法分类 (3)其他色谱方法 3 色谱法的特点 4 色谱曲线图及有关术语 （二）色谱流出曲线和色谱峰 由检测器输出的信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。 色谱流出曲线和色谱峰 基线：在实验操作条件下，色谱柱后没有样品组分流出时的流 出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。 峰高：色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以（h）表示。 （五）保留值 1.死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。 2. 保留时间tR 试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间，称为保留时间，如下图。 由于组分在色谱柱中的保留时间tR包含了组分随流动 相通过柱子所需的时间和组分在固定相中滞留所须的时 间，所以tR实际上是组分在固定相中保留的总时间。 3.调整保留时间tR′ 某组分的保留时间扣除死时间后，称为该组分的调整保留时间， 即 tR′= tR ? tM 4.死体积V0 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。当后两项很小可忽略不计时，死体积可由死时间与色谱柱出口的载气流速Fco（cm3·min-1）计算。 V0 = tMFco 5. 保留体积VR 指从进样开始到被测组分在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。保留时间与保留体积关系： VR= tR Fco 7.相对保留值r2,1 某组分2的调整保留值与组分1的调整保留值之比，称为相对保留值。 r2,1= tR2 ? / tR1′= VR2? / VR1? 由于相对保留值只与柱温及固定相性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它在色谱法中，特别是在气相色谱法中，广泛用作定性的依据。 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值，此时可用符号?表示，即 ? = tR ?(i) / tR ? (s) 式中tR ?(i)为后出峰的调整保留时间，所以?总是大于1的。相对保留值往往可作为衡量固定相选择性的指标，又称选择因子。 1.标准偏差?---即0.607倍峰高处色谱峰宽的一半。 2.半峰宽Y1/2---即峰高一半处对应的峰宽。它与标准 偏差的关系为 Y1/2=2.354? 3.峰底宽度Y---即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上 截距间的距离。它与标准偏差?的关系是 Y = 4 ? 从色谱流出曲线中，可得许多重要信息： (i) 根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含 组分的最 少个数； (ii) 根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析； (iii) 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析； (iv) 色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据； (v) 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。 （七）分配系数K和分配比k 1.分配系数K 色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次的分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次的吸附-脱附过程。 这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数K。 k值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称分配容量或容量因子。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。k值也决定于组分及固定相热力学性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。