华人甲基丙二酸血症MMAA和MMAB基因之分子遗传学研究.PDF

華人甲基丙二酸血症 MMAA 和 MMAB 基因之 分子遺傳學研究 Molecular Genetic Studies of the MMAA and MMAB Genes in Chinese Methylmalonic Acidemia 研 究 生 ：張嘉玲 (Chia-Ling Chang) 指導教授 ：蕭廣仁 (Kwang-Jen Hsiao, Ph.D.) 蘇宗笙 (Tsung-Sheng Su, Ph.D.) 國立陽明大學 生命科學院 遺傳學研究所 碩士論文 National Yang-Ming University School of Life Sciences Institute of Genetics Master Thesis 中華民國九十五年八月 August 2006 目錄 壹、緒論 一、甲基丙二酸血症之成因……………………………………………1 二、甲基丙二酸血症之分類與臨床症狀…………………………………..2 三、甲基丙二酸血症之鑑別診斷…………………………………………..3 四、甲基丙二酸血症之治療和預後……………………………………..…5 五、甲基丙二酸血症之產前診斷………………………………………..…6 六、cbl 型甲基丙二酸血症之分子遺傳學研究………………………6 七、研究目的……………………………………………………………7 貳、材料與方法 一、 檢體來源………………………………………………………………8 (一) 正常人 DNA 樣品來源..……………………………………8 (二) 對照組細胞 – GM1673；GM595 來源……..………………….8 (三) 甲基丙二酸血症病人及其家屬檢體來源…..…………………..8 二、 甲基丙二醯輔酶 A 變位酶 （MCM）活性分析……………………..13 三、 基因變異分析………………………………………………………….14 (一) 南方點墨法 ( Southern blot )...………………………………….14 (二) 聚合酶 鏈反應 ( PCR ).……………………………………….…18 (三) 自動核酸定序及序列比對…………………………………..…..20 (四) 核苷 酸多型性變異分析………………………………………...20 (五) 核苷 酸多型性單套型分析……………………………………...21 四、 基因之 pre-mRNA 及 mRNA 表現分析…………………………...21 (一) RNA 之抽取……………………………………………………..21 (二) 反轉錄聚合酶 鏈反應 ( RT-PCR )……………………………...21 參、結果 一、甲基丙二醯輔酶 A 變位酶 （MCM）活性分析結果……………..…25 二、MMAA、MMAB 基因核苷 酸多型性分析…………………………….26 (一) MMAA 基因核苷 酸多型性分析………………………………….26 (二) MMAB 基因核苷 酸多型性分析………………………………….28 三、甲基丙二酸血