双荧光素酶报告基因检测试剂盒-碧云天.PDF

双荧光素酶报告基因检测试剂盒 产品编号 产品名称 包装 RG009 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 产品简介：  碧云天生产的双荧光素酶报告基因检测试剂盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit) ，是先以荧光素(luciferin)为底物来 检测萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase) ，后以coelenterazine为底物来检测海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase，简称 Renilla luciferase)，并且在后续加入Renilla luciferase 的底物时同时加入了抑制Firefly luciferase催化luciferin发光的物质，使 后续检测仅仅测定到Renilla luciferase 的活性，实现双荧光素酶报告基因检测。  萤火虫荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin ，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence) 。海肾 荧光素酶可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide ，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物荧光。然后可以通过荧 光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定上述荧光素酶催化的氧化过程中释放的生物荧光。  通过荧光素酶和其底物这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣的基因转录的调控元 件克隆在firefly luciferase 的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞， 测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。Rinilla luciferase更 多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。  萤火虫荧光素酶催化luciferin 发光的最强发光波长为560nm 。海肾荧光素酶催化coelenterazine 发光的最强发光波长为 465nm 。  本试剂盒可以测定1000个样品。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 RG009-1 报告基因细胞裂解液 60ml ×10 RG009-2 萤火虫荧光素酶检测试剂 10ml×10 RG009-3 Renilla荧光素酶检测缓冲液 11ml ×10 RG009-4 Renilla荧光素酶检测底物(100X) 0. 1ml ×10 — 说明书 1份 保存条件： RG009-1和RG009-3在4 ℃保存1个月有效，-20 ℃保存一年有效，-70 ℃可以长期保存；RG009-2和RG009-4在-20 ℃避光保 存6个月有效，-70℃避光保存一年有效。 注意事项：  加入Renilla荧光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫荧光素酶的抑制可以达到99% 以上。但总会残留微量活性，因 此，宜在转染时把Renilla荧光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫荧光素酶RLU读数的10%。Renilla荧光素酶的读 数高于萤火虫荧光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。  为取得最佳测定效果，在用单管的荧光测定仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间 内，例如30秒内。  由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。  为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。一般 来说，如果不分装使用三次(期间冻融三次) ，对测定结果无明显影响。  样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但 是同一批样品最好使用相同的测定时间。  特