绿色萤光蛋白英文名称greenfluorescentproteinGFP.PDF

四機四D 4970H133 鄭柔柔 蛋白質中的夜明珠——綠色螢光蛋白 英文名稱 ：（green fluorescent protein,GFP ） 定義 ：從水母(Aequorea victoria)體內發現的發光蛋白。分子品質為26kDa ，由238 個氨基酸構成，第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成發光團，是主要發光的位置。 其發光團的形成不具物種專一性，發出螢光穩定，且不需依賴任何輔因數或其他 基質而發光。 綠色螢光蛋白就是一種酵素 ，他在和鈣離子結合之後，會造成螢光素（luciferin ） 的氧化，因而釋放能量，產生螢光。 基本介紹 ： 綠色螢光蛋白分子的形狀呈圓柱形，就像一 個桶，負責發光的基團位於桶中央，因此，綠色螢 光蛋白可形象地比喻成一個裝有色素的 “油漆 桶”。裝在 “桶”中的發光基團對藍色光照特別敏 感。當它受到藍光照射時，會吸收藍光的部分能 量，然後發射出綠色的螢光。利用這一性質，生物 學家們可以用綠色螢光蛋白來標記幾乎任何生物 分子或細胞，然後在藍光照射下進行顯微鏡觀察。 發現者： 20 世紀 60 年代，一位日本科學家從美國西岸打撈了大量發光水母，帶 回位於華盛頓州的實驗室進行研究。這些水母在受到外界的驚擾時會發出 綠色的螢光，這位科學家希望找到這種水母的螢光素酶。然而，經過長期 的重複努力，居然毫無收穫。他大膽地假設，這種學名叫 Aequorea victoria 的水母能發光也許並不是常規的螢光素/螢光素酶原理。他想，可能存在有 另一種能產生螢光的蛋白。此後，他進行了更多的實驗，終於搞清楚了這 種水母的特殊發光原理。原來，在這種水母的體內有一種叫水母素的物質， 在與鈣離子結合時會發出藍光，而這道藍光未經人所見就已被一種蛋白質 吸收，改發綠色的螢光。這種捕獲藍光並發出綠光的蛋白質，就是綠色螢 光蛋白。這位日本科學家也因為這項發現，獲得了剛剛頒發的諾貝爾化學 獎，他就是日本科學家下村修 。 綠色螢光蛋白有什麼用呢 ？ 螢光蛋白可分成食用性的天然藻蛋白和實驗用的螢光蛋白。最早被應用在基礎醫 學研究的追蹤顯像劑，後來則被廣泛應用到胚胎發育及器官發生學、轉殖動植物 研究、食品添加劑、甚至於有機二極體的製程應用上。 生物技術中的應用研究 1 〃分子標記 作為一種新型的報告基因 ，GFP 已在生物學的許多研究領域得到應用。 利用綠色螢光蛋白獨特的發光機制，可將 GFP 作為蛋白質標籤(protein tagging) ，即利用 DNA 重組技術，將目的基因與 GFP 基因構成 融合基因，轉染合適的細胞進行表達，然後借 助螢光顯微鏡便可對標記的蛋白質進行細胞 內活體觀察。由於GFP 相對較小，只有 238 個氨基酸，將其與其他蛋白融合後不影響自身 GFP 標記的微管 的發光功能，利用GFP 的這一特性已經加深 了我們對細胞內一些過程的瞭解，如細胞分 裂、染色體複製和分裂，發育和信號轉導等。1996 年，Ehrdardt 等人首次報 導了利用GFP 的特性研究細胞分化蛋白FtsZ 的定位。研究顯示FtsZ 在細胞 分裂位元點形成了一個環狀物，且至少有 9 種蛋白在細胞分裂中起重要作 用，儘管對這些蛋白功能仍然不是很清楚，但是利用 GFP 融合蛋白已經搞 清楚了它們聚合的順序以及在蛋白定位中的一些特徵。利用 GFP 來檢測目 標蛋白的定位已為我們提供了一種對細胞內的一些基本的生理過程進行更 詳盡觀察的新方法。 除用於特定蛋白的標記定位外，GFP 亦大量用於各種細胞器的標記如 細胞骨架 、質膜、細胞核等等。Shi 等人曾報導將 GFP 融合到大腸桿菌細胞 膜表面用作標記蛋白，這一技術將有助於提高多肽庫的篩選效率、疫苗的 研製、構建細胞生物感測器用作環境檢測