水稻类胡萝卜素含量的抽提与测定-Bio-protocol.PDF

/e1010152 DOI:10.21769/BioProtoc.1010152 水稻类胡萝卜素含量的抽提与测定 Extraction and Determination of Carotenoid Content in Rice 都浩，刘菊红，熊立仲* 作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：lizhongx@ 引用格式：都浩，刘菊红，熊立仲. (2018). 水稻类胡萝卜素含量的抽提与测定. Bio-101 e1010152. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010152. How to cite: Du, H., Liu, J. H. and Xiong, L. Z. (2018). Extraction and determination of carotenoid content in rice. Bio- 101 e1010152. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010152. (in Chinese) 实验原理：根据相似相容原理溶解抽提类胡萝卜素，再用高效液相色谱法分离检测， 高效液相色谱是色谱法的一个重要部分，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具 有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色 谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分离和分析 。 实验目的：可以检测水稻愈伤组织、叶片、种子等组织中类胡萝卜素含量，包括 α- 胡萝卜素、β-胡萝卜素、叶黄素、紫黄质的含量。 关键词：水稻，类胡萝卜素，高效液相色谱 材料与试剂 1. 50 ml 离心管，10 ml 离心管 2. 各种型号的枪头 3. 1 ml 注射器 (上海治宇医疗器械有限公司) 4. 0.22 μm 滤膜 (津腾尼龙66) 5. 水稻组织样品 6. 液氮 (湖北省畜牧局制氧厂) 7. BHT (3,5-二叔丁基-4-羟基甲苯) (Sigma, USA, CAS: 128-37-0, HPLC) Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010152 DOI:10.21769/BioProtoc.1010152 注：做为抗氧化剂保护类胡萝卜素成分也可作为内参做定 量分析，此试剂 也可用维生素E代替。 8. MTBE ( 甲基叔丁基醚) (Sigma, USA, CAS: 1634-04-4, HPLC) 注：做为类胡萝卜素溶解液。 9. TEA (三乙胺) (国药试剂，分析纯) 10. 乙腈 (Fisher, USA, CAS: 75-05-8, HPLC) 11. 甲醇 (Fisher, USA, CAS: 67-56-1, HPLC) 12. 正己烷 (国药试剂，分析纯) 13. 丙酮 (国药试剂，分析纯) 14. 无水乙醇 (国药试剂，分析纯) 15. α-胡萝卜素 (Sigma St Louis, MO, USA) 16. β-胡萝卜素 (Sigma St Louis, MO, USA) 17. 叶黄素 (Sigma St Louis, MO, USA) 18. 紫黄质 (Sigma St Louis, MO, USA) 19. 抽提Buffer (见溶液配方) 仪器设备 1. 超低温冰箱 2. 天平 3. 低温干燥仪 (Heto Lyolab 3000，Denmark) 4. 超声波仪 ( 昆山市超声波仪器有限公司) 5. 真空旋转仪 (Eppendorf concentrator 5301，USA) 6. 离心机 (Backman, USA) 7. 液相色谱仪 (Agilent 1100 series, USA) 8. 玻璃上样瓶及塑料内插管 (Agilent, USA) 9. 液相色谱柱：reverse-phase YMC 5-μm C30 column (250 x 4.6 mm) 实验步骤 1. 目的水稻组织取样后置于液氮中，带回实验室后可长期存于超低温冰箱或直接用 Copyright © 2018 The Authors; excl