细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒JC-1-凯基生物.PDF

细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1） JC-1 Apoptosis Detection Kit 说明书修订日期：2018.10.24 Cat number：KGA601-KGA604 Store at -20 ℃for 12 months For Research Use Only （科研专用） 一、试剂盒说明 大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ）的破坏，被认为是细胞凋亡 级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA 断裂）出现之前，一 旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 本试剂盒采用 JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)一种阳离 子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1 有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体 的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道 检测出绿色荧光，JC-1 可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ ψ）具有极 性，JC-1 依赖于△ ψ 的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光 为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2 ）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极 化，JC-1 从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。根椐这一特征检测线 粒体膜电位的变化。 本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。 二、 试剂盒组份 组份 KGA601 KGA602 KGA603 KGA604 储存条件 10 assays 20 assays 50 assays 100 assays JC-1 10µL 20µL 50µL 100µL -20℃,避光 10×Incubation Buffer 2mL 4mL 10mL 20mL 2-8℃ 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2 培养箱、微量移液器 1.5ml Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水 四、 使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. JC-1 避光保存及使用。 6 3. 细胞培养至汇合度 80-90%，收集细胞量在 1×10 /Test 。 4. 对 pH 变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代 Buffer 孵育染色及洗涤，或延长观测时间。 5. 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而 荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进 行荧光补偿及设门。 6. 组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，可选用凯基细胞悬液制备试剂盒 （KGA829）或线粒体提取试剂盒（KGA827）。 五、操作方法 1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组【用适当的凋亡诱导剂（如星形孢菌 素，staurosporine ），诱导适当时间后经其它检测（如 AnnexinV 或 Caspase 3 活性）证实确有凋亡 产生】，收集细胞； 2. JC-1 工作液的配置：取2µL JC-1 （500 ×），加入900µL 灭菌去离子水中，剧烈Vortex 充分溶解并 混匀JC-1。然后加入100µL 10× Incubation Buffer，混匀后即为1 mL 的JC-1 工作液。注：对于细胞 悬液每50-100 万细胞需500 µL JC-1 工作液。对于六孔板每孔需要1 mL 的JC-1 工作液，其它培养器 皿的JC-1 工作液的用量以此类推； 3. 1×Incubation