经合理的序列重组制备花生主要过敏原Arah2低致敏衍生物-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（７）：５４５９ ? 经合理的序列重组制备花生主要过敏原 Ａｒａｈ２低致敏衍生物 １，２ ３ ２，４ １，２ ２，４ １，２ ２，４ 易海涛 　刘　芳 　夏立新 　闫　浩 　刘飞燕 　李建杰 　刘志刚 （１深圳大学生命科学学院　深圳　５１８０６０　２深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所　深圳　５１８０６０） （３新疆华世丹药业股份有限公司　乌鲁木齐　８３００００　４深圳大学医学院　深圳　５１８０６０） 摘要　目的：构建经序列重组的Ａｒａｈ２表达载体，表达并纯化该蛋白，鉴定其低致敏原 性。方法：根据已鉴定的Ａｒａｈ２ＩｇＥ抗原表位，利用基因工程技术将Ａｒａｈ２基因进行合 理的组合，并将其序列进行合成，再将合成后的基因连入原核表达载体ｐＥＴ３２ａ（＋）上， ２＋ 然后转入Ｏｒｉｇａｍｉ宿主表达菌中；ＩＰＴＧ诱导表达；通过Ｎｉ亲和层析（ＦＰＬＣ）纯化目的蛋 白；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ鉴定该重组蛋白的低致敏原性。结果：测序结果表明合成 后的序列成功转入原核表达载体ｐＥＴ３２ａ（＋）上。重组蛋白纯化后经ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定， 目的蛋白大小与理论值相符。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和 ＥＬＩＳＡ结果均表明通过基因工程改造 的Ａｒａｈ２蛋白（ＳＡｒａｈ２）与重组的Ａｒａｈ２（ＲＡｒａｈ２）蛋白相比，结合花生过敏病人混 合血清中ＩｇＥ显著降低。结论：成功构建了经序列重组的Ａｒａｈ２表达载体，该基因表达 的重组蛋白具有良好的低致敏原性，这将会为花生过敏患者的脱敏治疗提供了新的安全 疫苗基础。 关键词　花生　重组　过敏原Ａｒａｈ２　低致敏衍生物　疫苗 中图分类号　Ｒ３９２１１ 　　花生过敏症是最常见的食物过敏症之一，据报道 一种急救的方法，长期使用会产生耐药性，而且也具有 大约有３００万的美国人对花生以及坚果类食物过敏， 很高的风险性。 ［１２］ 而且这种患病率还表现为上升趋势 。花生常引起 世界卫生组织（ＷＨＯ）认为，免疫脱敏治疗是唯一 严重的过敏反应，如咽喉水肿、急性严重哮喘、过敏性 ［９］ 可以彻底治疗过敏性疾病的根本性治疗方法 。但是 休克，发生很快，如不及时抢救，有可能导致死亡［３５］。 传统的免疫脱敏治疗大多使用变应原粗提物，因而包 与其他食物过敏不同，花生过敏是终身伴随性疾病，它 含很多缺点，例如副作用大［１０１２］、提取物量小、纯度低 ［６］ 不会因年龄的增长而消失 。 等等。但是随着基因工程的发展，重组蛋白为免疫脱 目前，对花生过敏的治疗仅仅局限在避免接触花 敏治疗带来了新的希望［１３１４］。重组蛋白通过原核表达 ［７］ 生过敏原和注射肾上腺素上 ，但花生已经广泛地作 可工业化生产得到达大量的蛋白，而且纯化的蛋白可 为食品添加剂添加到食品中，而且在我国还没有建立 以达到很高的纯度。 完善的食品标签法规，因而花生过敏患者仍可能在不 为了克服变应原粗提物进行免疫脱敏治疗缺点，