核磁共振波谱对大米脱水素K片段在模拟膜中的结构研究-分析化学.PDF

第46卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第5期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2018年5月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 664 ~669 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.171384 核磁共振波谱对大米脱水素K片段在模拟膜中的结构研究 薛蓉摇 吴亦洁摇 李晓晶* (中国科学院长春应用化学研究所,长春 130022) 摘摇 要摇 脱水素是一类植物抗逆相关蛋白,可帮助植物抵抗干旱、低温、盐碱等环境胁迫。 富含赖氨酸的 K片段是脱水素中的保守功能片段,在低温保护和膜保护功能中起至关重要的作用。 目前,脱水素及K片段 的作用机理仍不完全清楚。 本研究采用圆二色谱(CD)和核磁共振波谱(NMR)方法及分子动力学模拟计算 研究了具有抗菌活性的大米脱水素K片段在模拟膜中的三维结构及其与膜的结合方式。 圆二色谱研究表明, 水中呈现无规卷曲构象的K片段在模拟膜中会形成琢鄄螺旋结构。 核磁共振结构研究进一步证实了K片段在 模拟膜中的空间结构,即中间部分形成了两亲性的琢鄄螺旋结构,其中,疏水残基位于螺旋结构的一面,亲水残 基位于螺旋结构的另一面。 扩散排序(DOSY)核磁共振实验表明,K片段与膜在水溶液中形成了稳定的结合 体;顺磁性探针检测表明,整个K片段插入膜中,其中疏水面朝向模拟膜的疏水核,其它部分朝向模拟膜亲水 表层。 本研究得到的K片段在模拟膜中的精细结构为理解环境胁迫下K片段及脱水素与膜的作用机理提供 了重要信息。 关键词摇 脱水素;核磁共振;三维结构;膜结合;分子动力学模拟;K片段 1摇 引言 脱水素,又称二族胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白),是一类与植物抗逆反应相关的重要蛋白质。 这类蛋白质在植物胚胎发育晚期表达量十分丰富,在环境胁迫(如干旱、低温、盐碱等条件)下也会大量 [1,2] 累积 。 因此,脱水素被认为是在胁迫过程中对植物起保护作用的重要物质之一,是当前抗逆研究方 面备受关注的一类蛋白质。 脱水素的显著特点是拥有一个或多个富含赖氨酸的保守性K片段。 截掉 [3,4] K片段,会使得脱水素 ERD10、RcDhn5 和TaDHN鄄5 对脱氧脱氢酶(LDH)的低温保护活性降低 。 [5] K片段自身也可以对LDH起到低温保护作用 。近期研究表明,脱水素还具有抗菌活性,K片段在其 [6] 中起关键作用,且K片段自身具有类似全长蛋白的抵抗革兰氏阳性菌活性 。 在遭受各种胁迫的情况 下,小麦脱水素的K片段通过阻止蛋白聚集对大肠杆菌起到保护作用,而且K片段也具有抗革兰氏阴 [7,8] 性、阳性菌和真菌的活性 。 河岸葡萄的K片段可以在受到冻融损害时阻止膜融合,并在不改变膜的 [9] 流动性和表面可及性情况下降低膜转变温度,对膜起到重要的保护作用 。上述研究结果表明,在脱 水素的低温保护及抗菌功能中,K片段发挥着至关重要的作用。 尽管体内及体外实验证明了脱水素及 K片段的重要性,但目前对其分子作用机制仍不完全清楚。 功能是蛋白质结构的生化表现特征,结构是 蛋白质行驶功能的基础。 因此,研究脱水素及其重要功能区域的结构特征是全面认识其作用机制的有 效途径。 脱水素具有高度灵活的结构,它包