光合细菌生物制氢研究-微生物学专业论文.docxVIP

山东大学博士学位论文光合细菌生物制氢研究 山东大学博士学位论文 光合细菌生物制氢研究 摘要 f要实现可持续发展战略目标，开发新能源迫在眉睫。氢能，清洁无污 染，是一种理想“绿色”能源。生物制氢技术能妥善解决能源与环境矛盾， 促进经济与环境的协调发展，符合可持续发展的需求。光合细菌可降解有 机物转化太阳能为氢能、产氢不放氧、产氢效率高、产氢纯度高、对太阳 光谱有宽的响应范围以及可与多种生物组建形成良好微生态体系的特点， 被认为是很有希望的绿色氢来源之一。 低成本、低能耗、高效率是氢能技术实用化关键。以苹果酸或乳酸为 基质生产氢能，成本高，难以实用化。固定化技术在一定程度上可提高产 氢量，但固定化材料的价格和毒性、固定化颗粒的透光性和稳定性、基质 传递效率以及吸附细胞的能力等都是实际运行中应解决的关键问题。 从扩展将来技术实用化应用范围立场出发，本论文突破了光合细菌产 氢研究多采用苹果酸或乳酸为氢供体的传统做法，选用乙酸(有机废水厌 氧降解主要成分之一)为产氢基质进行了光合细菌的产氢研究。大 本论文主要集中在以下方面进行了深入研究：试验产氨装置到连续产 氢装置的设计；乙酸高活性产氢菌株的筛选及鉴定；乙酸产氢体系的建立； 基因水平上光合细菌快速归类方法建立：分子氢来源的探讨；光合放氢限 制性影响因素的研究；H2产生与细胞生长、pH变化、氧化还原电位以及 基质利用之间关系的全面探讨。在此基础上，采用控制pH和氧化还原电 位为主，调节底物数量为辅的策略进行了模拟有机废水的光合放氢研究。 I主要实验结果如下： ·在降解有机废水同时，转化太阳能为氢能是一条理想制氢途径。为 I 使选育的菌株实用性更强裤文选用有机废水主要降解产物一乙酸为唯一 使选育的菌株实用性更强裤文选用有机废水主要降解产物一乙酸为唯一 氢供体，利用3种不同营养类型的选择培养基(紫色非硫细菌、紫色硫细 菌和绿硫细菌培养基)，分别从不同水域环境取样进行了产氢光合细菌的 筛选。(从影响太阳能转化效率主要因素出发，本文在对分离纯化的15株 光合细菌形态学研究基础上、着重进行了最适生长温度、光合色素、有机 物和硫化物利用及耐盐能力的测定。在对每组细菌初筛基础上，本文对选 育出的8个菌株进行了生长动力学测定，其中Z、SP2、R3、Y7菌株能利 用乙酸快速生长。对其产氢动力学研究表明，它们均具有较高光合放氢活 性，产氢得率分别为308．9 mL．g～、272．4 mL．g～、256．1 mL．g～、235．8 m L．百1，其中Z菌株产氢量最高。这些菌株均生长迅速、能广泛利用多 种有机物、色素组成齐全且含量高，对太阳光谱有宽的响应范围，这种特 性在降解有机物转化太阳能为氢能技术中具有较高实用价值。 ·传统观点认为，谷氨酸仅是作为产氢合适氮源被提供，而不是作为 供氢体被利用。究竟谷氨酸在产氢过程中扮演何角色?乙酸又是如何被吸 收?引起产氢停止的最主要原因是什么?{本文分别以乙酸、谷氨酸、乙酸 和谷氨酸为产氢体系，研究了z菌株(鉴定为沼泽红假单胞菌， Rhodopseudomonaspalustris)和一株红杆菌(Rhodobacter sp．)的光合放 氢、细胞生长和基质利用动力学等。跆果表明，在仅含有乙酸为唯一氢供 体体系中，两菌株均表现出高产氮活性，但细胞生长不良。在仅含有谷氨 酸为唯一氢供体或氮源体系中，两菌株产氢活性微弱，但细胞生长良好。 在同时含有乙酸和谷氨酸反应体系中，ep．palustris Z菌株产氢活性等同 于仅含有乙酸反应体系，谷氨酸消耗较快；而Rhodobacter sp．菌株产氢得 率仅有乙酸体系的30％左右，谷氨酸利用率为80％。但两菌株细胞生长均 优于谷氨酸产氢体系。该结果表明，光合细菌光合放氢的主要供氢体是乙 酸而不是谷氨酸，谷氨酸对细胞生长起重要作用，基本上不能用于产氨。 分析两菌株细胞生长、乙酸消耗和pH变化规律，推断的结论是供氢体乙 山东大学博士学位论文酸是以HAc分子形式进入细胞，pH的上升是引起产氢速率下降和基质消 山东大学博士学位论文 酸是以HAc分子形式进入细胞，pH的上升是引起产氢速率下降和基质消 耗速率下降的最关键因素。j | ·以沼泽红假单胞菌(却．pa／ustr／s)Z菌株为研究对象，首先进 行了产氢最适供氢体研究。在此基础上，探求了生长和产氢的关系， 并着重进行了种子培养基、菌龄、接种量、供氢体数量、氮源数量、 光照强度和温度对产氢的影响研究。【结果表明：苹果酸、琥珀酸、丙 酮酸是该菌株生长的良好碳源，但相对乙酸而言，其产氢速率较低； 当种子来源于生长培养基(GM)时，产氢一般滞后于生长；种子培养 基和菌龄对产氢效率和产氢延滞期有显著影响。来自GM高菌龄和来 自产氢培养基(HM)对数期的预培养物，可显著提高产氢活性和总产 氢量