试验一基因工程试验常用溶液的配制与仪器使用.PPT

实验一 基因工程实验常用溶液的配制与仪器使用 【目的要求】 1．掌握基因工程实验常用试剂溶液的配制； 2．了解基因工程实验常用仪器的使用方法。 【注意事项】 1．称量要精确，特别是在配制标准溶液、缓冲液时，更加应该注意严格称量； 2．一般溶液都应用蒸馏水或去离子水配制，有特殊要求的除外； 3．配制溶液时应根据实验要求选择不同规格（化学纯、分析纯等）的试剂； 4．试剂应根据需要量配制，一般不宜过多，以免积压浪费或过期失效； 5．试剂（特别是液体）一经取出，不得再放回原瓶，以免因量器或药勺不清洁而污染整瓶试剂。取固体试剂时，必须使用洁净干燥的药勺； 【仪器材料与药品】 一、仪器材料 高压灭菌锅、电子天平、电子称、磁力搅拌器、普通冰箱、pH计、Milii-Q纯水器、超净工作台、容量瓶、三角瓶、pH试纸、称量纸、小药勺、烧杯、各种规格的试剂瓶（白色、棕色）、培养皿（Φ9cm）、玻璃棒。 二、药品 胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl 、NaOH、琼脂粉、琼脂糖、盐酸、冰乙酸、葡萄糖、Tris（三羟甲基氨基甲烷）、CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）、酚、氯仿、异戊醇、乙酸钾、SDS（十二烷基硫酸钠）、NaAc。 【实验操作】 一、试剂的配制 （一） 细菌培养基（* LB培养基）： 10g/L 细菌培养用胰蛋白胨； 5g/L 细菌培养用酵母提取物 10g/L NaCl 用NaOH调pH 7.0 （固体培养基加1.5%琼脂粉） （二） 常用溶液： 1*、1mol/L Tris-Cl 缓冲液（pH 8.0）：取12.1g Tris溶于约80ml水中，搅拌，加入盐酸调pH值至所需值，再加入重蒸水至总体积100ml。 2*、0.5mol/L EDTA 溶液 （pH 8.0）：取14.61g EDTA 加入80ml水，磁力搅拌器搅拌，加入NaOH调pH值至所需，重蒸水定容至100ml体积。 3*、TE 溶液（10mmol/L Tris，1mmol/L EDTA，pH 8.0） 1ml pH 8.0的 1mol/L Tris-Cl 缓冲液与0.2ml pH 8.0的 0.5mol/L EDTA 溶液混合后用重蒸水或纯水定容至100mL。 4*、50×TAE 缓冲液（电泳时使用1×TAE即可）：取24.2g Tris 溶于适量蒸馏水中，加入5.71 ml 冰乙酸、10ml pH8.0的0.5mol/L EDTA溶液，蒸馏水定容至100ml。 5*、大肠杆菌质粒提取液（碱裂解法） 溶液I： 50mmol/L 葡萄糖 25mmol/L Tris-Cl （pH8.0） 10mmol/L EDTA (pH8.0) 溶液II: 0.2mol/L NaOH 1%SDS （注：分别配制2×浓度的溶液，用前等体积混合） 溶液III：取29.4 g 乙酸钾溶于60ml 重蒸水中，溶解后再加入11.5 ml 冰乙酸以及重蒸水（约28 ml）定容至100ml。（此溶液称为5mol/L 乙酸钾，含3mol/L的钾及5mol/L的乙酸根）。 6*、植物DNA提取缓冲液（CTAB法） 2% CTAB（十六烷基三甲基溴化铵） 100 mmol/L 　Tris-Cl（pH8.0） 20 mmol/L EDTA（pH8.0） 1.4mol/L NaCl 7*、3mol/L NaAc （pH 5.2） 取24.6g NaAc溶于80ml水中，用乙酸调pH值至5.2，定容至100ml体积。 8*、0.1mol/L CaCl2 每100ml溶液含CaCl2（无水、分析纯）1.10g，用无菌双蒸水配制，灭菌处理。 9*、动物DNA提取液： 0.4 mol/L NaCl 10 mmol/L Tris-Cl (pH8.0) 2 mmol/L EDTA (pH8.0) 1% SDS 10*、6 mol/L NaCl 11、氯仿/异戊醇（V/V） 24︰1 12、10 mol/L NaOH 二、灭菌工作 （一）标有“*”的试剂均要进行高压灭菌； （二）1.5 ml 离心管、1 ml 移液吸头、0.2 ml移液吸头、0.01ml移液吸头、锥形瓶、0.2 ml PCR管、培养皿（Φ9cm）、1.8ml 螺旋口离心管 三、微量移液器的正确使用 1．选择所需量程范围的微量移液器； 2．弄清所选移液器的结构、各旋钮或按钮的功能(Fig. A)； 3．调节好所需吸取液体体积的刻度（包括小数位，一般为红色数字，如Fig. B所示）； 4．吸取液体（以日本进口微量移液器为例）： 1）选择相应的吸头/枪头； 2）拇指按住Push