菊花CmAP1基因克隆及其植物表达载体构建.pdfVIP

南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2017 ，48 （6 ）：952-959 ISSN 2095-1191 ； CODEN NNXAAB 南 方 农 业 学 报 http ：//卷 DOI ：10.3969/j.issn.2095-1191.2017.06.02 菊花CmAP1基因克隆及其植物表达载体构建 1 2 1 1* 3 梁 芳 ， 黄 萍 ， 袁秀云 ， 崔 波 ， 李 霞 1 2 （郑州师范学院 生物工程研究所 ， 郑州 450044 ； 河南农业职业学院， 郑州 451450 ； 3 郑州好日子园艺有限公司 ， 郑州 450064） 摘要：【目的】克隆菊花CmAPETALA1基因（CmAP1）并构建植物表达载体，为该基因功能的遗传改良打下研究基 础。【方法】采用同源克隆及RT-PCR从菊花叶片中克隆CmAP1基因，运用在线生物信息学分析工具对其核苷酸及氨基 酸序列进行分析， 利用实时荧光定量PCR 对该基因的组织表达差异进行分析 ， 并用双酶切法将目的基因与 pCAMBIA1300载体连接，构建植物表达载体 。 【结果】克隆获得的CmAP1基因（GenBank登录号KU872999 ）编码区开 放阅读框（ORF ）长741 bp ，编码246个氨基酸；CmAP1蛋白属亲水性蛋白，分子质量约28.3 kD 、理论等电点（pI ）为8.76 ， 预测该蛋白内含 10个磷酸化位点和2个潜在的N-糖基化位点； 蛋白氨基酸序列比对和系统发育进化分析结果表明， CmAP1蛋白与CDM111蛋白的同源性达98% ，属MADS-box基因家族A类基因的euAP1分支；实时荧光定量PCR分析 结果表明，CmAP1基因在花蕾中表达量极高 ， 在舌状花和筒状花中表达量较低， 而在营养器官中仅痕量表达。 将 CmAP1基因连接到pCAMBIA1300载体上，可成功构建植物表达载体pCAMBIA1300-CmAP 1。【结论】CmAP 1基因在花 的发育及形成过程中发挥重要作用，成功构建获得的植物表达载体pCAMBIA1300-CmAP 1可为后期利用基因工程手 段改变菊花花形态结构、调控花期及遗传改良打下基础。 关键词： 菊花； CmAPETALA1（CmAP1）； 基因克隆； 植物表达载体； 生物信息学 中图分类号： S682.11 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2017 ）06-0000-08 Ｃloning of ＣmAP1 gene from Ｃhrysanthemum morifolium and establishment of its plant expression vector 1 2 1 1 * 3