受精过程中形成的花粉管通道.PPTVIP

转基因的方法 周光宇的花粉管通道法 * * * 基因枪法 农杆菌转化法 显微注射法 花粉管通道法 花粉管通道法： 在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出。 我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。 花粉管的结构：花粉管的细胞学结构花粉管实际上是一种有多个核的单细胞结构。以麝香百合花粉管的电子显微镜像结构为例。在不进行生长的部分，即尖端稍后的基部细胞质中含有丰富的线粒体、高尔基小体、小泡体、脂质体以及囊状结构。与此形成对照，在进行生长的尖端只有囊状结构，而没有其他小体。细胞化学研究证明，花粉管尖端富含 DNA 、蛋白质、碳水化合物（ Rosen ， 1964 ）。 Sassen 观察了矮牵牛花粉粒和花粉管的细微结构。发现在被称为生殖核的外周具有真正的细胞壁。它是由两层构成的，内层含有纤维素微丝，外层含有某种耐酸的物质。生殖核 周围的细胞质中含有各种细胞器。 这种细胞质与营养核周围的细胞 质被某种结构分离出来。营养核 是分叶状的，被具有孔穴的核膜 包围着。高尔基器产生囊状结构， 聚集在花粉管的尖端。 花粉管通道法的原理：授粉后使外源 DNA 能沿着花粉管通道形成的途径渗透，经过珠心进入胚囊，最终转化尚不具备正常细胞壁的合子或早期胚胎细胞。这一技术原理可以应用于任何开花植物。水稻是自花授粉作物，因此这种方法同样适用于水稻。围绕着花粉管通道的形成是一个发生在植物花器结构中的传粉授精的过程。从狭义上理解就象字面表明的那样，授粉是指从花粉被送到柱头上到在柱头上萌发的过程，实际上应该是一个以狭义授粉为中心的包括这一过程的非常复杂的生理现象，即包括花粉形成、传粉、花粉萌发、花粉管伸长以及继花粉管伸长之后的受精问题，甚至还包括拒绝受精现象。 花粉管进入胚囊的方法： 1、从卵细胞与一个助细胞之间进入。 2、 从胚囊壁和一个助细胞之间进入。 3、直接进入一个助细胞。 钙离子的作用：钙离子在花粉管伸长中的作用萌发的花粉进入柱头是靠向水性（ hydrotropism ）进行的。而此后的伸长，有人认为是靠向电性（ electrotropism ）。其根据是，在柱头和子房之间可以观察到电位差，并且观察到电场可以决定花粉管伸长的方向。业已查明，越是靠近子房越与这种特性有关（ Welk ， 1965 ）。与这种向电性有关的是热不稳定的水溶性物质，特称其为向化性物质。向化性物质广泛地、组成性分布于植物各组织中。在受精的时候花粉管朝向胚珠的向化性是重要的，钙离子对此起重要作用。据认为，除了钙离子是向化性因子外，钾离子、多肽、胺和糖等可能都是与向化性有关的物质。一般来说可以认为从柱头到胚珠存在一个钙离子的浓度梯度。 优点：是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。 缺点：进行外源基因转化目标植物的工作时间受自然花期限制，同时必须充分了解每一种植物的开花受精的时间过程。在自然田间进行操作，受环境条件的影响很大。由于转基因以随机的方式整合进入受体染色体基因组中，故转基因工程植株的后代的遗传情况较为复杂。花粉管通道法的操作的经验性很强，需要一定的技术摸索和技巧。另一方面，对单籽粒的小花农作物的操作难度较大，由于获得大量的转基因种子比较困难，故工作效率也较低。 花粉管通道法的优缺点 * *