Tgf2转座子在团头鲂基因组中的插入效率.PDF

HEREDITAS (Beijing) 2013 8 , 35(8): 999―1006 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2013.00999 Tgf2 转座子在团头鲂基因组中的插入效率 郭秀明, 黄创新, 沈睿杰, 蒋霞云, 陈杰, 邹曙明 , , 201306 文章通过构建带金鱼Tgf2 转座子左右臂、斑马鱼肌球蛋白轻链2(Mlyz2)启动子和红色荧光蛋白(RFP) 的 供体质粒Tgf2-Mlyz2-RFP, 与Tgf2 转座酶mRNA 共同显微注射入团头鲂 1~2 细胞期受精卵, 检测金鱼 Tgf2 转 座子在团头鲂基因组中的整合效率。在团头鲂出膜仔鱼、30 d 和 180 d 幼鱼阶段, 可在鱼体背部和侧面肌肉观 察到荧光, 红色荧光蛋白的表达率为48.1%, PCR 检测结果显示, 金鱼 Tgf2 转座系统在团头鲂成鱼基因组中的 整合效率为31.5%; 对5 尾阳性团头鲂进行了RT-PCR 检测, 3 尾团头鲂在 12 个组织均能检测到较高的RFP 基 因的表达, 2 尾团头鲂仅在肌肉、皮和肾脏中存在较高的RFP 基因的表达, 显示RFP 基因在不同转基因团头鲂 个体中的组织表达存在一定差异; 通过检测Tgf2 转座子在团头鲂基因组插入位置5′端的侧翼序列, 检测出金鱼 Tgf2 转座系统在转基因团头鲂中的拷贝数至少为2 个, 每尾鱼的平均拷贝数大约为 5 个, 50% 以上插入位点的 侧翼序列可找出其它脊椎动物的相关同源性序列。研究结果显示金鱼 Tgf2 转座子可高效介导基因在团头鲂基 因组中插入, 为开展团头鲂转基因和基因捕获研究奠定了一定的基础。 Tgf2 转座子; 基因组; 团头鲂; 插入效率 Insertion efficiency of Tgf2 transposon in the genome of Megalo- brama amblycephala GUO Xiu-Ming, HUANG Chuang-Xin, SHEN Rui-Jie, JIANG Xia-Yun, CHEN Jie, ZOU Shu-Ming Key Laboratory of Freshwater Aquatic Genetic Resources, Ministry of Agriculture , Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China Abstract: To study insertion efficiency of goldfish Tgf2 transposon in the genome of Megalobrama amblycephala , we built Tgf2-Mlyz2-RFP donor plasmid with goldfish Tgf2 transposon left and right arms, and then co-injected with goldfish Tgf2 transposase mRNA into the 1–2 cell stage fertilized eggs of M. amblycephala . In 30 d- and 180 d-stage larval, RFP fluorescence can be observed in back and side muscle of the fish. The rate of RFP fluorescence expression was 48.1%. In adult fish, PCR results demonstrated that integration efficiency of goldfish Tgf2 transposition system was 31.5% in M. am- b