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第三章 灭菌与空气净化 生命科学学院 3.1 灭菌 一、概念 (1) 灭菌 指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。 (2) 消毒 是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、器具内外的病源微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽孢。 两者间的区别 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到消毒的目的。 二、灭菌方法 ⒈ 干热灭菌法 概念： 在干燥高温条件下，微生物细胞内各种与温度有关的氧化反应速度迅速增加，使微生物致死率增加的过程。 微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160～170 ℃，1～1.5 h。 实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。如对试管采取干热灭菌。 2 湿热灭菌法 概念：利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。 其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热灭菌对耐热芽孢杆菌来说，温度升高10 ℃时，灭菌速度常数可增加8～10倍，对营养细胞更高。 是目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件为121℃，30min。 ⒊ 电磁波、射线灭菌法 以紫外线最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2 m；对固体物料灭菌不彻底。 紫外线常用于水的灭菌。 4 化学药剂灭菌法 某些化学药剂能与微生物发生反应而具有杀菌的作用。 化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等。 化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。 ⑴ 高锰酸钾 高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物死亡，一般用0.1％～0.25％的溶液。 ⑵ 漂白粉 漂白粉的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有效。 (3) 氯水 常用于自来水的灭菌。 (6) 甲醛 甲醛(HCHO)是强还原剂，它能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用甲醛作为灭菌剂的根据。使用时可以以2份37％甲醛溶液与1份KMnO4混合，或者将37％甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。 (7) 过氧乙酸 过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细菌芽孢、真菌孢子和病毒都有杀灭作用。 6 过滤除菌法 利用过滤方法阻留微生物，也可达到除菌的目的，这就是过滤除菌法。 此法仅适用于澄清液体和气体的除菌。工业 上常用过滤法大量制备无菌空气，供好氧微生物培养过程使用。 7. 火焰灭菌法 利用火焰直接杀死微生物的灭菌法称为火焰灭菌法。该法方法简单，灭菌彻底，但使用范围有限，仅适用于接种针、玻璃棒、三角瓶口等的灭菌。 3.2 培养基灭菌 一、间歇式灭菌 二、连续式灭菌 连续灭菌也叫连消，其温度一般以126～132 ℃为宜，总蒸汽压力要求达到0.044～0.049 MPa以上。培养基采用连续灭菌时，需在培养基进入发酵罐前，直接用蒸汽进行空罐灭菌（空消），用无菌空气保压，待培养基流入罐后，开始冷却。灭菌时对培养基的加热可采用各种加热器。培养基的冷却方式有喷淋冷却式、真空冷却式、薄板换热器式几种方式，其过程均包括加热、维持和冷却。 ⑴ 培养基成分 油脂、糖类 低浓度(1％～2％)的NaCl溶液。 ⑵ pH值 pH值6.0～8.0，微生物最耐热；pH6.0，氢离子易渗入微生物细胞内，从而改变细胞的生理反应促使其死亡。 ⑶ 培养基中的颗粒 ⑷ 泡沫 泡沫中的空气形成隔热层，使传热困难，热难穿透过去杀灭微生物。 连续灭菌与分批灭菌比较的优点： (1) 可采用高温短时灭菌，培养基受热时间短，营养成分破坏少，有利于提高发酵产率； (2) 发酵罐利用率高； (3) 蒸汽负荷均衡； (4) 采用板式换热器时，可节约大量能量； (5) 适宜采用自动控制，劳动强度小。 ⑴ 灭菌锅内