固定化粘红酵母细胞制备L苯丙氨酸的研究-化学工艺专业论文.docxVIP

摘要固定化粘红酵母细胞制备L一苯丙氨酸的研究 摘要 固定化粘红酵母细胞制备L一苯丙氨酸的研究 作者简介：李铭，男，1981年9月生，师从成都理工大学钟辉教授，2008 年06月毕业于成都理工大学化学工艺专业，获得工学硕士学位。 摘要 L一苯丙氨酸(L—Phe)是具有生理活性的芳香族氨基酸，是人和动物必需的 氨基酸之一。其主要用于功能性食品添加剂阿斯巴甜的生产。目前，由于国内氨 基酸大输液和抗癌药的开发利用，特别是对糖精生产实行限制，阿斯巴甜需求量 激增，L Phe的市场需求也相应增加。 本文利用固定化粘红酵母细胞，以苯丙氨酸解氨酶(PAL)／肉桂酸途径制备 L—Phe。并对固定化条件、固定化细胞部分酶活性质、效应因子和戊二醛化学修 饰对固定化细胞酶活的影响、酶反应条件以及固定化细胞批式反应制备L—Phe进 行了研究。 由本实验室不同时期保存的10株粘红酵母菌出发，经过初筛和复筛，选出 高PAL酶活性的肋odotor以a耵utjnjs．06l 12—8—3菌株，作为本实验的供试菌。 分别以琼脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、海藻酸钙作为粘红酵母细胞固定化的 载体材料，通过对固定化后酶活回收率、载体机械强度等因素进行考察，最终确 定聚丙烯酰胺作为本实验固定化细胞的载体材料。 对固定化过程中的单体浓度、交联剂浓度、包埋浓度、包埋时间进行了单因 素考察，以单因素实验结果为参考，用响应面法对固定化条件进行了优化。首先， 用Plackett—BurⅢan法设计实验对以上四个影响因素进行了评价，并筛选出显著 影响因素——单体浓度和包埋浓度，第2步用最陡爬坡实验逼近以上两因素最优 水平。最后由中心复合实验及响应面分析确定主要影响因素的最佳条件。固定化 粘红酵母细胞的最优包埋条件为：单体浓度：16．7％；包埋浓度：43％；交联剂浓 度：2．O％；包埋时间：45min。在此条件下得到的固定化细胞酶活保留率可达63％， 较优化前提高了31％。 考察了固定化细胞的部分酶学性质，并与游离细胞进行了对比。在热稳定性 方面，固定化细胞与游离细胞基本一致，40℃保温时酶活较稳定，60℃保温条件 下，酶活迅速丧失。对比反应时程曲线发现，固定化细胞的最大反应速率出现在 4hr～8hr之间，较游离细胞出现了延滞。固定化后的细胞酶活稳定性明显增强， 连续进行5个批次转化反应后仍保持一定的催化活性，而游离细胞第二次使用时 酶活已经显著降低。 成都理【：人学硕+学位论文固定化细胞中添加效应因子——山梨醇(a=18：1)，使用O．05％的戊二醛溶 成都理【：人学硕+学位论文 固定化细胞中添加效应因子——山梨醇(a=18：1)，使用O．05％的戊二醛溶 液后处理固定化细胞都可使固定化细胞酶活提高。二者联合使用使固定化细胞的 酶活保留率和酶活稳定性大大提高。 通过对固定化细胞酶反应条件的优化，确定最优的酶反应条件：pH为11的 底物转化液体反应混合物中，NH。+浓度3．0mol／l，底物肉桂酸的浓度为139／1， 反应温度为30℃。 初步研究了固定化细胞半连续批式转化肉桂酸制备L—Phe。固定化细胞经过 10个批次的转化反应，大约有4．789的肉桂酸在O．1L的半连续批式生物反应器 中被固定了209湿细胞(收获自1L摇瓶液体培养物)的固定化细胞生物转化， 积累生成了5．339的L—Phe；相当于在液体反应混合物中L—Phe的积累浓度达到 了53．39／l。这与该菌株的中试整细胞一次批式转化工艺水平30 g／l比较，产 率提高了1．8倍。生物转化参数再进行进一步工艺优化，本非粮途径的酶法制 L-Phe仍有工业开发价值。 关键词：L一苯丙氨酸 固定化细胞粘红酵母 响应面分析法非粮途径 儿 Absn∞tstudy Absn∞t study on production of L-Phe by immobilized cells of Introduction ofthe autllor：LiMing，male，was bom in September，l 98 1．My tlltor waS Professor ZhongHui．I graduated丘om Chengdu Univers时of Techn0109y in chemical tecllIlology m勾or吼d was graJ吡ed me Master Degrce in Junc，2008． Abstract L—phenylal枷nc(L—Phe)is a啪m“c锄ino acid of physiological activi吼 a11d is one of essemia王眦i110 acid fbr human being and animal．it is mainly used for producing f