基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄卷叶伴随病毒3号检测方法.pdfVIP

新疆农业科学2016，53(2)：302—308 Sciences XinjiangAgricultural doi：10．6048／1．issn．1001—4330．2016．02．016 基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄 卷叶伴随病毒3号检测方法 张娜1，乾义柯2，魏霜3，胡白石4，陆平2，赛铁尔汗2， 刘中勇3，张永江5，张祥林6 4．南京农业大学．南京290000；5．中国检验检疫科学研究院植物检疫研究所，北京100029； 6．新疆出入境检验检疫局，鸟鲁木齐830052) 摘要：【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(C,rapevine如妒 roll—associatedvirus shock 70)保守序列，设计用于RPA检测的特异性引物，建立GLRaV一3的RPA检测方法，并对其特异性和 protein 灵敏度进行验证。【结果】建立RPA检测方法能够从GLRaV一3带毒株中检测到约380bp的特异性条带，仅 需在37℃下恒温反应40min，无需特殊的仪器设备，经特异性评价特异性好，且该方法与普通PCR检测灵敏 度基本一致。【结论】建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高，无需特殊的仪器设备，适合GLRaV一3的快 速检测方法。 关键词：葡萄卷叶伴随病毒3；RPA；检测方法 中图分类号：S41；S182文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2016)02—0302—07 3，GLRaV一3)是最重要的一种，为葡萄卷叶病毒 0 引言 leaf- 【研究意义】葡萄卷叶病毒病(Grapevinekb，包含13个开放阅读框架，分子量为35kDa的 roll—associated virus，GLRaV)是仅次于葡萄扇叶 CP由ORF6编码p1。它分布最广泛造成的经济 病毒病的一种世界性葡萄病毒病，在国内分布较 损失最大，而且也是这几种病毒中唯一具有自然 为普遍，田间感病率较高，对葡萄产量和品质影响 介体的病毒¨¨12J。GLRaV具有半潜隐性，导致 很大，且引起该病的病毒是由多种病毒单独或复 葡萄植株生长衰弱，果实成熟延迟，果粒大小不 合侵染造成[1。]。现已报道的葡萄卷叶伴随病毒 均，着色不良，含糖量减少，产量下降，对葡萄的生 有11种，分别为GLRaV一1～9，GLRaV—Dr，GL- 长发育有显著影响。因此，研究葡萄卷叶病毒检 RaV—De【4·51，我国已鉴定明确的葡萄卷叶伴随 测方法对该类病毒检验检疫和葡萄无毒苗木生产 病毒种类共有6种，即GLRaV一1～5和7∞’71。 具有重要意义。【前人研究进展】目前，检测葡萄 GLRaV已被证明属于典型的Clostero病毒，仅分 卷叶病毒的方法主要有指示植物法、酶联免疫吸 布于韧皮部和叶片，其传播不是靠机械，通常是靠 感染的母株或接穗等繁殖材料邛】。其中葡萄卷 PCR)和实时荧光PCR法。指示植物检测法比较 virus 叶伴随病毒3(Grapevineleafroll—associated 简单，但其检测速度