停循环相关脑损伤的大鼠海马线粒体BC蛋白获取及验证-云南大学学报.PDF

云南大学学报 自然科学版 停循环相关脑损伤的 大鼠海马线粒体 蛋白获取及验证 高永军 曹毅 袁 勇 张喜兵 赵宁辉 徐蔚 昆明医科大学 第二附属医院神经外科云南 昆明 摘要为了明确不同脑温停循环对大鼠海马线粒体差异蛋白质的影响探讨深低温停循环的脑保护机制 研究以导管和留置针分别穿刺颈内静脉和尾动脉建立大鼠闭胸式体外循环模型并在该模型下完 成常温 和深低温 状态下停循环 提取海马组织并纯化线粒体电镜超微结构 显示线粒体纯度和完整性均良好可以进行下一步研究按照蛋白质组学要求取线粒体蛋白质匀浆 预实验显示标本符合蛋白质组学的需要最后进行标记的蛋白质组学分析获取 个差异蛋白 质依据表达量 倍或 倍 之后对其中的差异蛋白质细胞色素氧化酶进行深入研 究免疫荧光染色精确定性表明线粒体和细胞质的蛋白在和组间的分布是有差异的 半定量分析提示 组之间蛋白表达量无明显变化 由此判断急性期深低温停循环的 脑保护作用与其减少线粒体蛋白质向胞质的释放有关 关键词线粒体超微结构免疫荧光细胞色素氧化酶深低温停循环 中图分类号文献标志码文章编号 深低温停循环 是依赖双向凝胶电泳结合基质辅助 能明显增强脑组织对缺血缺氧的耐受 激光解析电离飞行时间 该 能力停循环可以为手术提供相对无血的视野自 方法的优点是实验成本相对低廉技术方法成熟稳 世纪 年代技术广泛使用于复杂先心 定由于双向电泳对蛋白质的分离受到蛋白丰度 病主动脉弓及胸主动脉等大血管手术中能发挥 等电点分子量和疏水性等的限制对于低丰度蛋 有效的神经功能保护作用 但是技术本 白质相对分子质量 和相对分子质量 身是一个 双刃剑 随着停循环时间的延长 包括 极小蛋白质 极碱性蛋白和疏水性蛋白都难以 近期和远期的并发症逐渐增多高死残率和严重脑 进行有效分离 随着科学技术的进步 年 损害并发症发生率在 之间 美国应用生物系统公司 同时 技术本身会增加脑卒中的发生率 推出一项新的体外核素标记技 及早期死亡率 术相对和绝对定量核素标记 发生在儿童会影响术后远期智力的发育 随 技术 着研究的深入发现 结合间断性脑低流量 与该技术相伴随的是蛋白质标本的体外核素标记 灌注或能显著降低单独使用 时 试剂盒的成功开发液相色谱 串联质谱 并发症的发生率 蛋白质组学始于 世纪 年代 传统的方法 也称液相色谱 二 收稿日期 基金项目教育部博士学科点基金 云南省自然科学基金 云南省卫生厅科技项目 作者简介高永军 男山西人讲师博士生主要从事神经外科临床及低温脑保护方面的研究 通信作者徐蔚 男江苏人教授博士生导师主要从事神经外科临床及脑保护方面的研究 第 期高永军等停循环相关脑损伤的大鼠海马线粒体蛋白获取及验证