生化实验报告.docx

PAGE 1 PAGE 7 PAGE 0 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc369928842 实验一 蛋白质及氨基酸的颜色反应 PAGEREF _Toc369928842 \h 0 HYPERLINK \l _Toc369928843 实验二 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 PAGEREF _Toc369928843 \h 5 HYPERLINK \l _Toc369928844 实验三 蛋白质的性质实验 PAGEREF _Toc369928844 \h 7 HYPERLINK \l _Toc369928845 实验四 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 PAGEREF _Toc369928845 \h 9 HYPERLINK \l _Toc369928846 实验五 考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质含量 PAGEREF _Toc369928846 \h 12 HYPERLINK \l _Toc369928847 实验六 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGEREF _Toc369928847 \h 14 HYPERLINK \l _Toc369928848 第二部分 附 录 PAGEREF _Toc369928848 \h 17 HYPERLINK \l _Toc369928849 附录Ⅰ 实验室规则与应急处理 PAGEREF _Toc369928849 \h 17 HYPERLINK \l _Toc369928850 附录Ⅱ 实验记录和实验报告的书写 PAGEREF _Toc369928850 \h 18 HYPERLINK \l _Toc369928851 附录Ⅲ 实验室基本操作 PAGEREF _Toc369928851 \h 19 HYPERLINK \l _Toc369928852 附录Ⅳ 实验所需的药品、试剂的配制 PAGEREF _Toc369928852 \h 22 HYPERLINK \l _Toc369928853 附录Ⅵ 实验所需的设备及其使用方法 PAGEREF _Toc369928853 \h 25 实验一 蛋白质及氨基酸的颜色反应 ?一、目的和要求? 1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理。? 2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法。? 二、仪器与试剂 （一）仪器 1、试管；2、试管架；3、恒温水槽；4、酒精灯；5、电吹风机；8、分析天平。 （二）试剂? 1、蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，多层纱布过滤，滤液4oC保存； 2、氢氧化钠溶液（10%）：称取20.0g NaOH，蒸馏水溶解并定容至200mL； 3、硫酸铜溶液（1%）；称取2.0g CuSO4，蒸馏水溶解并定容至200mL； 4、甘氨酸溶液（0.5%）： 色氨酸溶液（0.5%）： 酪氨酸溶液（0.5%）： 精氨酸（0.5%）： 组氨酸溶液（0.5%）： 苯丙氨酸酸溶液（0.5%）： 蛋氨酸溶液（0.5%）： 半胱氨酸溶液（0.5%）： 分别称取各氨基酸1.0g，蒸馏水分别溶解并定容至200mL，4oC保存； 5、茚三酮水溶液（0.1%）：称取0.1g茚三酮，蒸馏水溶解并定容至100mL； 6、茚三酮-乙醇溶液（0.1%）：称取0.1g茚三酮，乙醇溶解并定容至100mL，即用即配； 7、头发，指甲屑； 8、浓硝酸（比重1.42）：浓盐酸；浓硫酸（分析纯）；冰醋酸（一般含有乙醛酸杂质， 故可用冰醋酸代替乙醛酸）； 9、苯酚溶液（0.5% ）：称取1.0g苯酚，蒸馏水溶解并定容至200ml； 10、α-萘酚乙醇溶液（1%）：称取1.0g α-萘酚，95%乙醇溶解并定容至100ml即用即配； 11、 NaBrO溶液：2克溴溶于100ml 5% NaOH中，置棕色瓶中，可在暗处保存两周 12、鸡蛋清： 13、偶氮试剂：溶液A（称取5.0g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中）；溶液B（称取5.0g对氨基苯磺酸溶于1000ml水中，溶解后再加入5ml浓硫酸）；A、B溶液分别保存在密闭瓶中，用时以等体积混合。? 14、醋酸铅溶液（10% ）：称取2.0g Pb(Ac)2，蒸馏水溶解并定容至100ml； 15、醋酸铅试纸：将滤纸条浸入10% 醋酸铅溶液中，湿透后取出，100oC烘干即可。 三、实验内容? 对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、坂口反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等进行定性确定。? （一）双缩脲反应 ?1、实验原理 当尿素加热到180oC左右时，两个分子的尿素缩合成双缩脲并放出一个分子氨，双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成红色络合物，