课件：检验科微生物室.pptVIP

培养基的质量控制 一般性状：①外观：透明、清亮、无混浊、无沉淀，颜色符合要求，表面湿润但无水汽、平整、光洁无凹坑和气泡。整块平板厚薄均匀。②厚度：一般厚度在3mm，但MH平板厚度≥4mm。斜面的长度≤试管长度的2/3。③pH是细菌生长的重要条件之一，合格培养基的pH应在规定值上下0.2的范围内。 无菌试验：新制备或新买的培养基在使用前要随机抽取一定数量的样品作无菌试验。 购买的培养基要有质量保证如合格证明等文件；若无质量保证需检测相应的性能。 - 培养基的质量控制 细菌生长试验：所有的培养基在使用前还必须做细菌生长试验以测定培养基性能是否符合要求。标准菌株分2种：一种是已知的可在某种培养基上生长并产生典型生物学性状的，对培养基中的某种物质产生阳性反应的菌株；另一种是用已知的不能在某种培养基上生长或对培养基中的某种物质产生阴性生化反应的菌株。如血琼脂平板：乙型溶血性链球菌生长，β 溶血；甲型链球菌，a溶血；巧克力琼脂平板：流感嗜血杆菌生长良好；中国蓝琼脂平板和SS琼脂平板：革兰阴性菌生长，革兰阳性菌不生长。 - 试剂质控 临床微生物实验室常用的试剂包括染色液、诊断血清以及各种生化反应试剂等。 染色液及染色方法质量控制：购买的或配置的染色液，每次需做好相关的记录，如操作者和开瓶日期等；还要进行染色步骤质控，如革兰染色在一张玻片上同时涂有金葡菌和大肠杆菌，以保证染色性判断准确无误。 常用生化试剂的质控：随着细菌鉴定仪和快速微量生化鉴定板条的普及，临床微生物检验常用的生化试剂种类日趋减少，应注意在用试剂在贮存时的避光、冷藏等要求，保证试剂的稳定性。不要使用过期的试剂。 诊断血清的质控：诊断血清是一种重要的细菌鉴定试剂，应从有资质的生产单位购买。验收时必须看清生产批号、血清效价、透明度与色泽。试验中应注意无菌操作，避免细菌污染。要经常检查贮存在4℃冰箱中的各种血清，若发现混浊，出现絮状，应停止使用。为保证血清凝集反应结果准确，应每3个月对血清进行一次质控。不要使用过期的血清。 - 纸片药敏试验的室内质控 基础质控：连续做30天，如失控超过3次还需继续，如失控低于3次可改为每周1次 纠控：每周质控中发生失控应纠控，方法：连续5天，每天1次，每次重复5个纸片，如找到明确失控原因，可立即改为每周1次，否者继续 4℃冰箱保存一周的用量 药物敏感试验是临床微生物检验的重要步骤之一，其结果正确与否涉及治疗效果的好坏。 - 仪器的质量控制 按仪器说明规定用标准菌株定期对不同批号的试剂进行质控 对冰箱、二氧化碳孵箱、普通孵箱、水浴箱等基本设备的每日温度、气体浓度的监控记录；显微镜、细菌鉴定仪等仪器的使用、保养、维修记录。以保障实验室各种设备、仪器的正常运转。 对仪器进行性能验证，若有两台以上的仪器则要进行仪器比对 - 细菌鉴定的基本步骤 标本的分离培养（这关系到整个结果的可靠性） 培养结果的观察（致病菌的选择） 细菌的分纯、鉴定（天地人鉴定系统、ATB半自动微生物鉴定、VITEK系统、MicroScan自动微生物分析系统、Sensititre 全自动微生物鉴定系统） - 常用的培养基种类和用途 血平板—普通细菌用 巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑膜炎球菌和淋球菌用 中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用 SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用 M-H平板—细菌药敏用 TCBS平板—弧菌科细菌用 真菌显色平板—真菌培养用 罗氏培养基—分枝杆菌用 - 常见标本细菌培养基选择 痰-血平板、巧克力平板、（中国蓝/麦康凯）放CO2环境，能分离肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌 尿-血平板、（中国蓝/麦康凯）定量培养 粪便-中国蓝/麦康凯平板、SS平板等能分离沙门菌、志贺菌等，报告“未检出XXX菌” 脑脊液-血平板、巧克力平板CO2环境，能分离常见苛养菌（脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、单核细胞李斯特菌等），常规进行革兰染色、墨汁染色 胸腹水：血平板、巧克力、肉汤 胃液、胆汁：血平板、中国兰、肉汤 真菌培养：沙氏培养基 厌氧培养：厌氧血平板、中国兰、肉汤、涂片 阴拭子、脓、分泌物：血平板、中国兰、肉汤 咽、眼、耳拭子：血平板、巧克力平板、中国兰、肉汤； TB培养：罗氏鸡蛋培养 注：血平板和巧克力平板放置CO2培养箱或烛缸培养，其它放置普通培养环境 - 培养结果的观察（致病菌的选择） 观察培养基上是否有细菌生长 观察生长情况（是单一种细菌还是多种细菌） 观察生长的细菌是否具有某些典型特征 排除污染细菌 对于无菌部位所采集的标本（CSF、胸水、腹水、关节液、血液、骨髓、各器官穿刺液等等），只要培养出细菌（排除污染）一律都视为致病菌。 对于有菌部位或易被正常菌群污染的标本，培养出细菌后，要根据标本的不同，排除正常菌群后，再挑选致病菌（请看下图）。 - 无菌