单分子荧光共振能量转移用于生物大分子构象动态变化过程-分析化学.PDF

第46卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 特约来稿 第6期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2018年6月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 803~813 藡蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥藡蕥蕥 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.181136 特 约 来稿 藡蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥 藡 单分子荧光共振能量转移 用于生物大分子构象动态变化过程研究进展 1,2 1 1,2 1,2 1,2 1 *1 孙乐乐 摇 苏莹莹摇 高延静 摇 李 威 摇 吕慧 摇 李 宾摇 李 迪 1(中国科学院上海应用物理研究所,界面物理与技术重点实验室,物理生物实验室生物成像中心,上海201800) 2(中国科学院大学,北京 100049) 摘摇 要摇 生物大分子参与生命活动的各个过程,在单分子水平上实时观测和分析生物大分子自身的结构动 态以及生物大分子相互作用的动态过程,对于深入理解生物大分子的作用机制具有重要意义。 自提出以来, 单分子荧光共振能量转移技术逐渐展现出其在研究生物大分子构象变化和相互作用过程等方面的巨大潜 力,一系列新的作用机理陆续被提出。 本文对单分子荧光共振能量转移技术在蛋白质与核酸分子构象动态变 化、蛋白质鄄蛋白质相互作用以及蛋白质鄄核酸相互作用等方面取得的研究进展进行了综述。 关键词摇 单分子荧光共振能量转移;生物大分子;构象动态;相互作用;评述 1摇 引言 细胞生命活动各个过程都离不开蛋白质、核酸等生物大分子。 研究生物大分子的作用机制对于理 解基本生物学过程至关重要,然而普通的生物学研究手段无法实时观测生物大分子发挥作用时的状态 变化,只能间接地观测宏观现象,然后对过程机制进行推断。 依据宏观现象推出的作用机理只能在一定 程度上帮助人们认识生物过程,生物分子究竟如何发挥作用,必须有微观的证据才更有说服力,例如 ATP合成酶的作用机制、G蛋白偶联受体如何传递信号等,都是在取得单分子水平上的证据后才得到更 加深入的认识[1~3]。 对于宏观系综研究,单分子研究的最大优势是可以直接观测到单个生物分子发挥 作用时的构象动态或生物分子间相互作用时分子间距离的变化[4~8] ,获取的机制更加接近真实情况。 [9] 此外,单分子水平的研究能够揭示生物分子之间的个体差异 ,有助于全面深入地认识生物分子的功 能性质。 [10] 目前,在单分子水平研究生物分子构象变化或生物分子相互作用动态过程的技术有光镊 、 磁镊[11,12]、原子力显微镜[13~16]及单分子荧光技术[17~21]。 光镊和磁镊技术要求高,操作难度大,无法进 行高通量研究;原子力显微镜的成像时间分辨率低,因此在单分子研究方面应用不多。 单分子荧光技术 [17] 起源于20世纪90年代 ,目前已经逐渐成熟地被用于生物学领域,并出现多个分支,其中单分子荧光 [22] 共振能量转移技术(SM鄄FRET)被广泛用于生物分子相互作用的研究 。 单分子荧光共振能量转移技 [23] 术是指能够观测单个生物分子上荧光供体和受体之间共振能量转移的技术 ,具有以下优势:(1)荧光 共振能量转移的原理使其能够观测到生物大分子发挥功能时不同结构域或亚基之间空间位