课件：第十八章临床标本的细菌学检验.ppt

* * （二）检验方法和操作流程 2. 分离培养 标本离心后接种血平板、巧克力平板，5-10％ CO2 35℃ 培养18-24h，进一步鉴定。 血平板 CO2 环境培养，易于识别β溶血链球菌和肺炎链球菌 巧克力平板CO2 环境培养，有利于检出肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌。 3. 报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。 查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。 第三节 痰标本 下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有下呼吸道感染。 常见的病原菌主要有： （1）革兰阳性菌 肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌 结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌 （2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌 （2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体 （一）痰标本的采集 标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。 呼吸系统标本细菌学检验方法和操作流程 （二）检验方法和操作流程 1. 肉眼观察 包括颜色、粘度、有无血丝或脓。 2. 涂片检查 其一、确定标本是否适合作培养，在低倍镜下观察白细胞和上皮细胞的数目多少来评定(如表)； 其二、初步判定是否有病原菌存在。 分级 白细胞（个） 上皮细胞（个） A 25 10 B 25 25 C 10 25 痰标本镜下分类 注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本 （1）一般细菌涂片 挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片， 革兰染色后镜检。 （2）结核分枝杆菌涂片 ①挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，作抗酸染色镜检。 ②浓集法菌检 根据所见结果报告“找到(或未查到)抗酸杆菌”。 （3）放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻片上、覆以盖玻片、轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构、如见中央为交织的菌丝，末端呈放线状排列，然后揭去盖玻片。干燥后作革兰和抗酸染色镜检。 如查见中间菌丝部分为革兰阳性，四周放射菌丝为革兰阴性，而抗酸染色阴性，可报告为“找到染色、形态疑似放线菌”; 如查见革兰染色结果与放线菌相同，而抗酸染色弱阳性者，可报告为“找到染色、形态疑似奴卡菌”; 肉眼观察未见黄色颗粒，革兰染色与抗酸染色均为阴性，报告为阴性。 结核分枝杆菌 奴卡菌 3. 培养 （1）培养标本的选择：应选择粘液脓痰作涂片，排除不合格的标本。 （2）痰标本培养前处理：用无菌生理盐水将痰洗涤3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6)，35oC水浴90min，使痰液均质化后备用。 （3）分离培养 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB ，中国蓝)琼脂平板，置5%-10%二氧化碳环境中，35℃培养18-24h,根据菌落及形态特点，作出初步判断然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同时作药物敏感测定。 4. 报告方式 痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告“正常菌群”。查出致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌的量化指标(表5-3)，如“少量、中等或多量”。 分级 划线区菌落数目 第1区 第2区 第3区 少见（+） 10 少量（++） 10 5 中等（+++） 10 5 5 多量（++++） 10 5 5 表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标 第四节 尿标本 中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要 价值。 细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。 正常人中段尿细菌数≤103 cfu/ml （一）尿液标本的采集 1.中段尿采集法 最常用 2.直接导尿采集法 易造成逆行感染，尽量不用 3.留置导尿管收集尿液法 注意不能从尿液收集袋中采集标本 4.膀胱穿刺法 （二）尿液标本中常见的病原菌 细菌中80％为革兰阴性杆菌，20％为革兰阳性菌 （三）检验方法和操作流程 【涂片检查 】 取离心沉淀物涂片 （1）一般细菌 革兰染色、镜检、报告 （2）淋病奈瑟菌 革兰染色、镜检，如发现肾形双球 菌，