植物次生代谢产物生物碱测定液相色谱质谱法征求-中国标准化研究院.DOC

《植物次生代谢产物生物碱测定 液相色谱质谱法》 (征求意见稿) 编制说明 一、任务来源 本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二0一七年国家标准制修订项目》，项目编号T-424”。本项任务由中国标准化研究院提出并归口，项目周期24个月。本标准起草工作组由河北省食品检验研究院、河北医科大学等单位共同组成。 二、标准编制原则 本标准遵循GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和标准编写内容参考了与生物碱检测标准相关的文献，标准参照了 GB/T6379.1-2004《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）》第1部分总则与定义和 GB/T 6379.2-2004《测量方法与结果的准确度》第2部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法。 标准制定的背景及意义 在司法鉴定实践中，时常遇到因不当治疗、他杀和意外而致的有毒生物碱中毒事件，由于植物中所含有毒生物碱成分复杂多样、毒性大、含量低以及中毒者体内代谢迅速、样品量受限制且中毒无特意性临床表现等问题，使复杂生物体系中有毒生物碱成分的鉴定及定量分析成分毒物分析中的难题。 生物碱是存在于自然界（主要为植物）中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中药中重要的有效成分之一。按照生物碱的基本结构，可分为60类左右，如有机胺类（秋水仙碱）、莨菪烷类（阿托品、东莨菪碱）、二萜类（乌头碱）等。大多数生物碱几乎不溶或难溶于水，能溶于氯仿、乙醚、酒精、丙酮、苯等有机溶剂。绝大多数生物碱分布在高等植物，尤其是双子叶植物中，如毛茛科、罂粟科、茄科、夹竹桃科、小檗科等。有的一种植物体内含有多种甚至数十种生物碱，并且它们的化学结构有相似之处。形形色色的生物碱为我们提供了许多神奇的药物，在医学上做出了长足的贡献，但也不乏有毒甚至剧毒的生物碱。 乌头碱临床上具有镇痛作用，适用于消化系统癌痛，外用时能麻痹周围神经末梢，产生局部麻醉和镇痛作用。乌头碱毒性极大，能兴奋麻痹感觉神经和中枢神经，兴奋麻痹胆碱能神经和呼吸中枢，兴奋心脏迷走神经，直接毒害心肌细胞，故其心脏毒的致命性最为严重。颠茄碱（阿托品）是副交感神经抑制剂，为阻断M胆碱受体的抗胆碱药，能解除平滑肌的痉挛(包括解除血管痉挛，改善微血管循环)；抑制腺体分泌；解除迷走神经对心脏的抑制，使心跳加快；散大瞳孔，使眼压升高；兴奋呼吸中枢。东莨菪碱，又称天仙子碱，一种莨菪烷型生物碱,它存在于茄科植物中。作用与阿托品相似，其散瞳及抑制腺体分泌作用比阿托品强，对呼吸中枢具兴奋作用，但对大脑皮质有明显的抑制作用，此外还有扩张毛细血管、改善微循环以及抗晕船晕车等作用。秋水仙碱在临床上主要用于乳腺癌、肺癌、胃癌、皮肤癌及慢性粒细胞白血病，还可用于治疗痛风急性发作。秋水仙碱的毒性较大，如果人体摄入秋水仙碱后，会在人体组织内被氧化，生成二秋水仙碱。而二秋水仙碱是一种剧毒物质，可毒害人体胃肠道、泌尿系统 。番木鳖碱能破坏中枢神经，导致强烈反应，最终会导致肌肉萎缩，中毒者会窒息，无力及身体抽搐，先脖子发硬，然后肩膀及腿痉挛，直到中毒者蜷缩成弓形，并且只要中毒者说话或做动作就会再次痉挛，尸体仍然会抽搐，面目狰狞。 生物碱的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。HPLC检出限高，很多情况下不能满足生物碱鉴定的需要，且仅以保留时间进行定性分析存在风险，当目标物浓度低时基质干扰严重、选择性差，易出现假阳性。GC-MS分析有毒生物碱则需要衍生化后才能进行分析，操作过程复杂。液相色谱-串联质谱法同时具备液相色谱高效的在线分离能力和质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力，可以同时得到化合物的保留时间、分子量以及特征结构碎片等丰富的信息，其多反应监测（MRM）技术兼具有选择离子扫描的灵敏度和二级质谱的特征性，在痕量分析方面具有很大的优势。目前国内外研究较少，且检测项目单一，检测方法灵敏度较低。本实验建立了同时测定生物检材中11种有毒生物碱的LC-MS/MS检测方法，方法操作简单，结果稳定可靠，可为监管部门提供技术支撑。 标准工作过程 （1）确立标准制定的基本原则，收集国际和国内生物产业领域的标准。 （2）比较与研究我国原国家标准及国际标准相关内容，并结合方法的研究工作，制定出标准的讨论稿。 （3）提交《生物检材中11种生物碱的检测 液相色谱质谱法（征求意见稿）、《编制说明》。 标准的重要内容 1、方法的研制和实验条件的确定 1.1 色谱柱的选择及分离条件的选择 对比了3种色谱柱（Waters Xbridge BEH C18：2.1*100mm，2.5μm；Thermo Accuore-150 C18：2.1