电子科大细胞生物学第三章 细胞生物学研究方法科目讲解.pptVIP

;第三章 细胞生物学研究方法;;细胞形态结构观察方法 细胞组分分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术;第一节 细胞形态结构的观察方法;1、普通光学显微镜技术;;2、荧光显微镜技术;（Laser Scanning Confocal Microscopy）;排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率(1.4—1.7倍)，可重构样品的三维结构。;4、荧光共振能量转移技术;; 可选择供体蛋白CFP和受体蛋白YFP分别与两种目的蛋白融合表达。当这两个融合蛋白之间的距离在5-10nm的范围内，供体CFP发出的荧光可被YFP所吸收，并激发YFP发出黄色荧光。此时可通过测量CFP荧光强度的损失量来确定这两个蛋白是否相互作用。两个蛋白距离越近，CFP所发出的荧光被YFP接收的量就越多，检测器所接收到的荧光越少。反之，不会产生FRET效应。;5、荧光漂白恢复技术;高能量激光束照射使特定区域，该区域荧光会发生不可逆淬灭。光漂白区荧光的恢复可通过非漂白区的荧光标记分子在膜上或胞质中运动至光漂白区来完成。;; 是研究膜蛋白或膜脂流动性的基本实验技术之一。 荧光素标记膜蛋白或膜脂，然后用激光束照射细胞表面某一区域，使被照射区的荧光淬灭变暗。由于膜的流动性，淬灭区域的亮度逐渐增加，最后恢复到与周围的荧光强度相等。根据荧光恢复的速度可推算出膜蛋白或膜脂