使用Real-timePCR检测引起西瓜蔓枯病菌的方法.PDF

台灣農業研究(1. Taiwan Agric. Res.) 的(2):15H58 (2014) DOI: 10.6156/JTA R/2014.06302.06 使用 Real-time PCR 檢測引起西瓜蔓枯病菌的方法評估 關政平 1 ， 黃彥華2 曾清山 l 林宗俊3 石信德4 摘要 關政平、黃彥華、曾清山、林宗俊、石信德。 2014 。使用 Rea1-time PCR 檢測引起西瓜蔓 枯病菌的方法評估。台灣農業研究的(2):151一158 。 本研究根據西瓜蔓枯病菌 (Di吵mella bryoniae) 的 rDNA 設計出專一性的引子對及利用 real-time PCR 法 與 TaqMan 螢光探針進行D. bryoniae 之檢測並與傳統 PCRi去作比較，結果顯示 real-time PCR 法較傳統 PCR j去靈敏度提高約 100 倍。利用 real-time PCR 法偵測被D. bryoniae 在感染的西瓜組織，結果發現D. bryoniae 主要分布在西瓜的莖部 。本研究使用 real-time PCR 法可增幅出 D. bryoniae 的專一性核酸片段，並檢測感染 西}f，..組織及種子中之 D. bryoniae 核酸，將可提供西瓜蔓枯病之病害檢測與病菌量化之判定 。 關鏈詞:西瓜蔓枯病、 Di吵mella bryoniae 、 Real-time PCR 、 診斷技術。 oniae 之方法為種苗出芽 ( grow-out) 或種子轉 目U 昌 潰 (blotter assays) 試驗。這些方法須具有廣 蔓枯病 (gummy stem blight) 係由于囊 大的育苗場地，直接利用肉眼觀察種苗之病徵 茵 Didymella bryoniae (Fuckel) Rehm [Myco- 與發病情形或利用鏡檢等技術加以判斷，惟 sphaerella citrullina (C. O. Sm.)] 所引起的葫 此等方法需要時問、空間、密集的勞力及需 蘆科作物之病害。 D. bryoniae (無性世代為 有對病原菌之專業知識才能判斷病徵 (www Ascochyta cucumeris Faut r. Roum.) 會感染 ) 。綜觀過去在種苗的檢測方 包括有西瓜、甜瓜、南瓜及胡瓜等葫蘆科作物 法，已有諸多利用 PCR 方法進行檢測的研究 的墅、葉、花及果實，罹病之瓜類葉片、葉柄 報告:如以 PCR 檢測甘藍種子是否帶有Alter­ 及莖部會有褐色病變，所產生子囊拍子及柄 nαria radicina (Pryor Gilbertson 2001) 及 拍子再經由風及雨水傳播至其他植株 (Sitterly 西瓜果斑病病害 (Ha et al. 2009) ;使用 real­ Keinath 1996) 。果實及花卉受到感染後 ， timePCR 檢測洋蔥種子是否帶菌Botrytis 會導致果實內部腐爛並且使其種子遭到污染 spp. (Chilvers et al. 2007) 等。 西瓜是世界上 (Keinath et a/ , 1995) 。此外，此病菌可存活於 重要的瓜類作物之一，