课件：第八章特殊毒性及其试验与评价方法.ppt

②小鼠肺肿瘤诱发试验 染毒途径常用腹腔注射，也可灌胃或吸入，一般16~30周可结束实验，观察肺肿瘤的发生。较敏感的小鼠为A系小鼠。此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为乌拉坦（抗肿瘤药物），促长剂为二丁基经基甲苯(BHT)。 ③大鼠肝转化灶诱发试验 对大鼠进行肝大部切除术后，给以受试物，一般可在8～14周结束实验，观察肝转化灶生成。肝转化灶是癌前病变，有γ-谷氨酰转肽酶活性升高，G6P酶和ATP酶活性降低，以及铁摄取能力降低。转化灶可用组织化学或免疫化学方法鉴定。 此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为二乙基亚硝胺(DEN)，促长剂为苯巴比妥(PB)。 ④雌性大鼠乳腺癌诱发试验 一般可用SD大鼠（或Wistar大鼠），实验周期为6个月。多环烃芳香胺、氯烷、亚硝基脲等能在9个月以内诱发乳腺癌。 此四个试验不是成组试验，应根据受试物的特点选择使用。此四个试验任一试验得到阳性结果的意义与长期动物致癌试验相似，但阴性结果并不能排除受试物的致癌性。 致突变试验主要是对致癌物的筛选，其依据是化学物的致突变性与致癌性相联系，即大多数化学致癌物具有致突变性，而大多数非致癌物无致突变性。 利用致突变试验进行致癌物的筛查的毒理学意义是可检出基因遗传毒性的致癌物。 ?局限性：无法检出非遗传毒物的致癌性（假阴性）和具有遗传毒性的非致癌物（假阳性）。 （三）致突变试验 致突变试验用于致癌物筛选的短期试验如下： ①基因突变试验：鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)，培养哺乳动物细胞TK或HPRT正向突变试验； ②染色体畸变试验：体外细胞系细胞遗传学分析，小鼠骨髓微核试验，大鼠骨髓染色体畸变试验； ③原发性DNA损伤：DNA加合物，链断裂，DNA修复诱导（细菌SOS反应，大鼠肝UDS诱导），姐妹染色单体交换试验（SCE）； ④体外细胞转化：叙利亚地鼠胚胎细胞，Balb/c 3T3细胞。 细胞转化是指受试物与正常细胞在体外接触，如有致癌作用，可使正常细胞形态、功能发生变化，发生与癌细胞相似的过程。 试验的目的是了解体外培养细胞接触受试物后，细胞生长是否发生癌变，其观察内容包括生长自控能力、细胞形态、细胞生长能力、生化表型以及移植于动物体内形成肿瘤的能力等。 （四）细胞转化试验 原理：癌细胞与正常细胞的不同是其核型的改变和因此而导致的生长自控能力的丧失。 细胞自控能力丧失可能导致细胞在离体培养时生长特性改变。 正常细胞：在液体培养时，克隆中的细胞排列有序、只能生长成单层； 癌细胞：贴壁生长的克隆失去接触抑制的能力，因而形成的“恶性转化”克隆中的细胞排列杂乱，重叠生长。 判断是否出现了细胞的恶变，须将转化的细胞植入试验动物体内，观察转化的细胞是否可发展成肿瘤。 恶变的细胞表现 细胞偏大，且大小不等； 核大而畸形，染色质深染而粗糙，核浆比例倒置，核膜粗厚，核仁增生而肥大； 核仁核胞浆因RNA增多而偏酸性，呈嗜碱性染色而偏蓝； 多见核分裂现象； 正常的接触抑制消失，它的克隆是多层细胞且排列紊乱； 生长表型改变。 常用的细胞种类 细胞选择的主要原则： 1、体外容易培养和传代，阴性细胞克隆背景较低； 2、细胞自发突变率低，或自发转化能力很弱； 3、已获得无限生长能力，但仍保持接触抑制而无致肿瘤性。 有三类细胞可应用于细胞转化试验： ①原代细胞，如叙利亚仓鼠胚胎细胞（SHE细胞）、人类成纤维细胞、小鼠皮肤或大鼠支气管上皮细胞等； ②细胞系，常用细胞系BAIJB/C-3T2，C3H10T1/2和BHK-1； ③病毒感染细胞，如RLV/RE细胞（劳舍尔白血病病毒感染的Fisher大鼠胚胎细胞）和SA7/SHE细胞（猿猴腺病毒感染的SHE细胞）。 优点：试验周期短，经济方便；一个细胞克隆或细胞巢就相当于一只受试动物；受试物直接与靶细胞作用，便于控制剂量，不受吸收、代谢、分布的影响，并且可不受体内免疫系统等干扰；便于观察。 缺点：仍存在假阳性、假阴性等问题。 2. 转基因动物致癌检测模型 动物致癌试验耗时长，耗费人力物力大，使用的染毒剂量大。转基因底物为快速检测致癌物和促癌物提供了新的重要途径。 转基因小鼠可用于研究在致癌过程中特定基因的作用，可用于分析化学物-基因的相互作用。 （1）转癌基因小鼠 与转录启动子连接的癌基因转入后可直接在某些特定的组织中高效表达，使该组织细胞处于引发状态，这类转基因动物是研究化学物致癌作用的敏感体系。携带癌基因的转基因动物可用于致癌试验，试验周期仅3个月左右，有希望发展成代替长期动物致癌试验的试验系统。 这些携带有癌基因的转基因动物，可用来研究外源化学物与肿瘤相关基因的作用及外源化学物在致