开创基因工程.ppt

基因定点诱变技术与基因突变的比较 比较 基因定点诱变 基因突变 相同点 发生的过程 结果 不同点 场所 手段 方向 DNA复制过程中 产生新基因，从而产生新性状 生物体外 生物体内 定向改造 不定向性 PCR技术 物理化学方法 应用之一：工业生产 改造酶的结构，提高酶的热稳定性 例如：酵母菌的丙糖磷酸异构酶上有两个天门冬酰胺，在分别转变为苏氨酸和异亮氨酸后，酶的热稳定性提高50%。此外，在蛋白质分子中引入二硫键也可以显著提高蛋白质的热稳定性。 蛋白质工程的应用 应用之二：医药生产 改造天然抗体，使之对肿瘤细胞具有特异性识别和杀伤力 实例2：改造一种纤维蛋白溶解酶原激活因子（t—PA），可以在临床上用于溶解血栓块，医治心肌梗死等疾病。 实例1：制造鼠—人嵌合抗体，对人体的不良反应减少。 蛋白质工程的应用 科学家对鼠源杂交瘤抗体进行改造，生产出效果更好的鼠——人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠——人嵌合抗体的过程。 可变区 恒定区 可变区 恒定区 鼠抗体 人抗体 鼠—人嵌合抗体 鼠—人嵌合抗体的最大优点是减少了人体的不良反应 应用之三：疾病与病毒检测 制造蛋白质芯片用于检测某些病毒 实例：利用SARS病人和SARS疑似病人的诊断，还可用来观察某人感染SARS病毒之后体内特异性抗体的动态变化，帮组监测病情的发展。 蛋白质工程的应用 蛋白质工程的示意图 预期的蛋白质功能 设计预期的蛋白质的结构 推测应有的氨基酸序列 目的基因 从动物体内获取类似蛋白的核酸片段（基因） 载体 重组DNA分子 ① 转基因动物 获得预期蛋白质 受精卵 ② ③ ④ ⑤ PCR技术 比较：基因工程和蛋白质工程 基因工程 蛋白质工程 相同点 都要改造基因，都属于分子水平 产生新的 基因型，无新基因 基因（型） 产生的蛋白质 原有的 新的 联系 蛋白质工程以基因工程为基础， 是基因工程的应用和延伸 * 两种引物 加热至90-95℃ 降温至55-60 ℃ 升温至70-75 ℃ 原料及能量 (二)利用PCR技术扩增目的基因 (二)利用PCR技术扩增目的基因 ⑥过程： a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b.退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c.延伸（70℃-75℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下，从引物的3′端开始延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 ①概念： ②原理: ③条件： ④方式： ⑤结果： DNA复制与PCR技术 DNA复制 PCR技术 场所 主要在细胞核 生物体外 酶 解旋酶、 DNA聚合酶 TaqDNA聚合酶 解旋方式 解旋酶 高温 遵循原则 碱基互补配对 碱基互补配对 结果 DNA分子 DNA分子片段 4.下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ D (1)目的： a.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给 下一代， b.并使目的基因能够表达和发挥作用。 （二）基因表达载体构建——核心 (2)基因表达载体由________、__________、________ ___________等部分组成。 启动子 目的基因 终止子 标记基因 启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的 部位，驱动基因转录出mRNA； 终止子：位于基因的尾端，使转录停止； 标记基因：鉴别受体细胞中是否含目的基因， 筛选出含目的基因的细胞 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 限制酶处理 同一种 过程: （三）将目的基因导入受体细胞 导入植物细胞： 导入动物细胞： 导入微生物细胞： 受体细胞 导入方法 体细胞 受精卵 受精卵 显微注射法 Ca2＋处理法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 1.将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （三）将目的基因导入受体细胞 你能分析出农杆菌不能将目的基因导入到单子叶植物的原因吗?若想将一个抗病基因导入小麦中,理论上你认为应该怎么做? 因为单子叶植物不能分泌出大量的酚类化合物来吸引农杆菌 向单子叶