课件：细菌耐药表型检测方法剖析.ppt

AmpC酶新的检测方法 4.质粒型AmpC酶三联纸片方法的检测 （1）将标准菌株ATCC 25922按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H平板上。 （2）在M-H平板中心贴一片头孢西汀(30ug/片) 纸片，在纸片边缘贴有待测菌的纸片（纸片上含20ul， PH8.0，1M Tris-0.1MEDTA）。 （3）另一侧边缘贴有产AmpC酶菌的纸片（同上）。 （4）35℃孵育18-24h，如待检菌出现扁平或凹陷的抑菌环为阳性。 2019 - * 四、金属β-内酰胺酶的表型检测方法 1.头孢他啶+2-巯基丙酸法(CAZ+NCA) （1）将待测菌株按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H平板上。 （2）在M-H平板上分别贴两片头孢他啶(30ug/片)纸片，纸片中心相距2.5cm,将其中一片头孢他啶纸片上加3ul 2-巯基丙酸，35℃孵育18-24h。 （3）结果观察：若加有2-巯基乙酸的头孢他啶纸片抑菌圈大于单个头孢他啶的抑菌圈（≧4mm），则为阳性，即产金属β-内酰胺酶。 2019 - * 金属β-内酰胺酶的表型检测方法 2.亚胺培南+EDTA法(IMP+EDTA) （1）将待测菌株按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H平板上。 （2）在M-H平板上贴一片亚胺培南(10ug/片) 纸片，在距亚胺培南纸片中心1.5cm处贴无菌空白纸片一片，将0.5M EDTA 10ul 均匀浸注于空白纸片上，35℃孵育18-24h。 （3）结果观察：若两片纸片抑菌圈有协同作用，则为阳性，即产金属β-内酰胺酶。 2019 - * 五、肠杆菌科碳青霉烯霉筛选和确证（2009年CLSI:M100-S19.APPB.124） 1.如果菌株对碳青霉烯类药物表现为“I”或“R”没必要再去检验该酶，（医生通常不会选用“I”或“R”的药物），但主要以感染控制为目的检验该酶。 2.什么是碳青霉烯酶？ 一类能水解或灭活碳青霉烯类抗生素的酶，如：KPC（肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶）. 碳青霉烯类抗生素 －Doripenem（目前无CLSI折点） －厄他培南 －亚胺培南 －美洛培南 2019 - * 3.肠杆菌科碳青霉烯敏感及碳青霉烯酶筛选的折点 ＊亚胺培南不用于变形/普罗威登/摩根菌属中碳青霉烯酶的筛选。因为这些菌属会产 生非碳青霉烯酶导致的亚胺培南MIC升高。 ＊＊NA：不可用（本试验不适用于筛查） 2019 - * 4.什么时候做改良Hodge试验？ 如果头孢噻肟、头孢他啶和 /或头孢曲松全部“R”。 注：头孢比肟对于碳青霉烯酶产生株的结果是不稳定的。 MIC（μg/ml) 抑菌圈(mm) 厄他培南 2 19-21 亚胺培南＊ 2-4 NA ＊＊ 美洛培南 2-4 16-21 5.做改良的Hodge试验（确证试验） （1）ATCC25922配成0.5麦氏浊度，1：10稀释。 （2）用棉签满涂布于MH平板上，就像纸片扩散法药敏试验一样，在中心加一张厄他培南或美洛培南（最好）纸片。 （3）取待测菌（1－3号）从纸片边缘向外划（用1μl接种环）。 （4）35℃培养过夜后，观察结果。 （5）大肠沿着菌株划线的生长表明碳青霉烯水解酶的产生。 2019 - * 2019 - * 6.改良的Hodge试验：检测碳青霉烯酶活性的表型试验，在检测KPC方面有90％的敏感性/特异性，检测其他碳青霉烯酶时敏感性/特异性不定（如：低水平的金属酶）。 7. 改良Hodge试验的质量控制(2009年CLSI:M100-S19.APPB.124)： 随患者菌株每天检测。 （1）改良Hodge试验阳性菌株: 肺克ATCC BAA-1705 （2） 改良Hodge试验阴性菌株：肺克ATCC BAA-1706 2019 - * - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 细菌耐药表型的检测方法 2019 - * 细菌耐药表型的检测 2019