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新疆农业科学2010。47(9)：1728—1732
Sciences
XinjiangAgricultural
海岛棉组培mRNA差异显示体系的建立
代鑫，陈全家，高文伟，曲延英
(新疆农业大学农a-生物重点技术实验室．鸟鲁未齐830052)
摘要：【目的】建立适合海岛棉组织培养过程中差异基因表达研究的DDRT—PCR体系。【方法】试验选取海
岛棉体胚发育过程中的胚性愈伤组织。无菌苗下胚轴为对照。对引物浓度、dNTP浓度、酶浓度和退火温度等
影响差异显示PCR的关键因素进行单因素优化实验。【结果】确定了海岛棉组织培养差异显示PER体系为
(10t,h)：cDNA U，Bufferl．
2止；dNTP200t咖ol／L；上游引物0．4t,L(10pM)，下游引物O．5止(10删)；脚酶O．5
o止。前5个循环退火温度为50℃，后30个循环退火温度为57．I℃。【结论】用该体系扩增，PcR产物特异性
高，条带清晰，背景污染少。
关键词：海岛棉；差异显示PCR；体系建立
中图分类号：s562；S188文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2010}09—1728—05
TheConstructionoftheDDRT—PCRon
SystemGossypium
barbadenseTissueCulture
DAI
Xin．CHEN
Q啪一jia．GAOWen—wei，QUYah—ying
(KeyLab．旷Agrieul加alBiotechnology．XinjiangAgriculturalUniversity-Urumqi830052-China)
constmctaDDRT—PCRfor ofthe
theresearchdifferential
Abstract：【Objective]To system geneexpression
of barbadensetissuesin usedthe eMlustissueofthe
Gossypium culture．【Method】11le
experiment embryonic
selectodthe a8controltoresearchconditionsof
growingGossypiumbarbadense∞materials．and
asepflieseedling
the thecritical the of and
factomsuchas concentration and
DDRT—PCR。optimizing primem．dNTPenzyme
theDDRT—PCRof8ea—islandcottontissuecultureis2
temperature．【Results】Confirmed
annealing system pL
110 lower
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