独龙牛瘤胃细菌纤维素酶基因克隆.pdfVIP

南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2017 ，48（5 ）：901-906 5 期 http ：// ISSN 2095-1191 ； CODEN NNXAAB DOI ：10.3969/j.issn.2095-1191.2017.05.024 独龙牛瘤胃细菌纤维素酶基因克隆 1 1 2 2 2 1，2 杨天龙 ， 王淑玲 ， 顾招兵 ， 朱仁俊 ， 刘旭川 ， 张春勇 ， 杨舒黎1，2 1，2 1，2 * ， 毛华明 ， 冷 静 1 2 （云南省动物营养与饲料科学重点实验室， 昆明 650201 ； 云南农业大学 动物科学技术学院， 昆明 650201） 摘要：【目的】从分子生物学水平对独龙牛的瘤胃纤维素酶基因资源进行筛选及酶学特性研究，为后续开发利用 新的纤维素酶提供参考依据，也为揭示瘤胃微生物降解纤维素 的作用机理打下基础。 【方法】提取独龙牛瘤胃微生物 中的大片段基因组DNA ，构建瘤胃微生物基因组文库，并进行纤维素酶活性筛选，筛选获得的高活性基因经测序后进 行生物信息学分析与酶学性质研究 。 【结果】从独龙牛瘤胃中共获得20352个阳性克隆，白斑率达92% ，构建的瘤胃微 生物基因组文库容量899.6 Mb ，空载率1.82%。 从瘤胃微生物基因组文库筛选获得2个具有纤维素酶活性的阳性克隆 （B 1和B2 ），其中，B 1基因序列长 1230 bp，编码409个氨基酸，基因编码产物与来自Ruminococcus albus纤维素酶基因编 码产物（ β-1,4- 内切葡聚糖酶，GenBank登录号P23661.1 ）的覆盖率高达99% ，其同源性高达97% ；B2基因序列长 1002 bp ，编码333个氨基酸，基因编码产物与Uncultured microorganism纤维素酶基因编码产物（纤维糊精酶，GenBank登录 号ADB80112.1 ）的覆盖率高达99% ，其同源性为83%。B 1和B2基因可在Rosetta原核表达宿主菌中成功诱导表达，B1纤 维素酶的最适pH为6.0 ，最适温度40 ℃ ；B2纤维素酶的最适pH为6.0 ，最适温度40~50 ℃。 【结论】从构建的独龙牛瘤胃 微生物基因文库中筛选获得2株具有较高活力的纤维素酶（B1和B2 ），其中，B1为β-1,4- 内切葡聚糖酶，而B2为新的纤 维糊精酶，可为纤维素的体外降解提供新型材料。 关键词： 独龙牛瘤胃； 基因文库； 纤维素酶； 克隆 中图分类号： S823.89 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2017 ）05-0901-06 Gene clone of Gayal rumen bacteria cellulase 1 1