微波对X线照射小鼠造血损伤的保护作用及机制研究.DOC

微波对X线照射小鼠造血损伤的保护作用及机制研究 王长振，刘尧，王少霞，徐新萍，王丽峰，彭瑞云，胡向军 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 目的：造血组织是电磁辐射重要的效应器官，也是电离辐射的敏感组织之一。本课题研究30mW/cm2微波对X射线造血组织损伤的保护作用及其机制，旨在为微波保护电离造血损伤提供理论基础和实验资料。方法：（1）微波对X射线辐射的小鼠30天存活率的影响：小鼠随机分为五组，即正常对照组、单独微波组（30mW/cm2）、单独电离组（7.0Gy X射线）、联合前照组（30mW/cm2 +7.0Gy X射线）和联合后照组（7.0Gy X射线+30mW/cm2），每组12只小鼠。各组小鼠分别进行相应照射后，观察小鼠的存活率，计算平均存活天数和保护系数，分析联合前照和联合后照对辐射损伤小鼠保护作用的差异，明确后续研究时微波和X射线的照射顺序；（2）30mW/cm2微波对X射线造血损伤的体内保护作用：小鼠随机分为四组，即正常对照组、单独微波组（30mW/cm2）、单独电离组（5.0Gy X射线）、联合后照组（5.0Gy X射线+30mW/cm2），每组10只。于照射后2d、7d、12d取外周血计数白细胞（WBC），测定脾脏系数，取骨髓病理组织切片观察，并用造血细胞（CFC）集落形成实验检测小鼠造血干/祖细胞的增殖能力。（3）30mW/cm2微波对X射线造血损伤小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外保护作用：小鼠骨实质来源的BMSCs体外常规分离和培养，并进行诱导分化鉴定。BMSCs的实验分组和照射条件与30mW/cm2微波对X射线造血损伤的体内保护作用研究相一致，MTT法检测BMSCs在1d、2d、3d、4d、5d、6d的增殖变化。（4）30mW/cm2微波对X射线造血损伤保护机制的研究：实验分组和照射条件与30mW/cm2微波对X射线造血损伤的体内保护作用的研究相一致，照射后2d、7d、12d 3个时间点采用实时荧光定量RT- PCR（qRT- PCR）检测过氧化氢酶(Catalase)、Notch1 mRNA基因相对表达量的变化。结果：（1）联合后照组（7.0Gy X射线+30mW/cm2)小鼠存活率由7.0Gy X射线单独电离组的33.3％上升至66.7％，平均存活时间16.00±4.32，保护系数为1.51；而联合前照组（30mW/cm2 +7.0Gy X射线）的存活率为16.7%，平均存活时间9.20±2.94，结果显示联合后照组保护作用优于联合前照组（p0.05）。（2）联合后照组（5.0Gy X射线+30mW/cm2）可使WBC和脾脏系数的下降程度明显减轻，与单独电离组（5.0Gy X射线）比较，差异有统计学意义（p0.05）；骨髓腔内造血细胞较单独电离组减少轻，造血组织容积明显增高，各系造血细胞再生灶明显；CFC数量照射后2d、12d较单独电离组显著增加(p0.05和p0.01)；（3）体外分离培养BMSCs能够成功诱导成脂细胞和成骨细胞；联合后照组（5.0Gy X射线+30mW/cm2）较单独电离组BMSCs增殖明显升高(p0.05和p0.01)；（4）qRT- PCR检测显示，联合后照组（5.0Gy X射线+30mW/cm2）的Catalase、Notch1 mRNA表达在第2d、7d均显著高于单独电离组(p0.05和p0.01)。结论：(1) 联合后照组（7.0Gy X射线+30mW/cm2)小鼠存活率明显优于联合前照组（30mW/cm2 +7.0Gy X射线），因此在后续研究时均选择在电离辐射后进行微波照射；（2）30mW/cm2微波体内对5.0Gy X射线电离辐射小鼠造血损伤有保护作用，体外能减少X射线电离辐射所致的BMSCs细胞死亡，促进BMSCs细胞的增殖；（3）30mW/cm2微波能上调5.0Gy X射线电离辐射小鼠Catalase、Notch1 mRNA表达水平，可能是其对X射线造血组织损伤的保护作用机制之一。 关键词：微波；X射线；造血损伤；保护作用