生物竞赛-生物化学-44重组DNA技术-杨荣武《生物化学原理（第二版）（三）》(60张PPT).pptVIP

第四十四章 重组DNA技术 提纲 重组DNA技术简介 基因克隆的详细步骤 基因克隆的应用 聚合酶链式反应 蛋白质工程 研究核酸与蛋白质相互作用的主要方法 研究蛋白质之间相互作用的主要方法 SELEX技术 生物芯片技术 基因组学研究概述 重组DNA 重组DNA也称为基因克隆或分子克隆，是通过某种手段将不同来源的DNA片段连接起来形成嵌合体分子，并进行扩增和纯化以供进一步研究的技术。 有效的基因克隆至少满足五个条件：（1）具有容纳外源基因或序列的载体；（2）具有将外源基因或序列导入载体的工具；（3）具有合适的宿主细胞；（4）具有将重组DNA引入到宿主细胞的途径；（5）具有选择和筛选重组体的方法。 基因克隆的载体 载体的作用是容纳被克隆的目标基因，以便将它们带入到特定的宿主细胞中进行扩增或表达。 一种理想的载体至少包括： 大多数载体含有原核细胞DNA复制起始区，以便于在原核系统中的扩增； 某些载体还含有真核细胞DNA复制起始区，以方便在真核细胞内的自主复制； 含有集中了多种常用的限制性内切酶切点的多克隆位点，以方便各种克隆片段的插入和建立DNA文库； 带有抗生素抗性基因或其它选择性标记，有利于克隆的筛选和鉴别； 某些载体含有可诱导的或组织特异性的启动子或增强子序列，有利于控制被插入的基因在转染细胞或转基因动物内的表达； 现代的载体一般含有多功能的结构元件，同时兼顾到克隆、DNA测序、