第11章 动物细胞培养生物制药.pptVIP

第11章 动物细胞培养与生物制药 11.1 动物细胞培养的特点 11.1.1 动物细胞特点 无细胞壁 倍增时间长，生长缓慢 培养中需氧量少，对搅拌敏感 多以聚集体存在 原代细胞培养50代即开始退化 细胞连接复杂 11.1.2 动物细胞培养定义 动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。 是动物细胞工程的基础。 11.1.2 动物细胞培养定义 动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。 体外培养分类: 1)原代培养(初代培养) 指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程. 实效培养的细胞一般增殖10代左右. 原代培养的细胞称为原代细胞. 2)传代培养(继代培养) 由初代培养产生的能进行无限次传代培 养的细胞群称细胞系. 体外培养的细胞与体内的起源细胞在形态和功能方面都存在一定的差异,甚至经过长期稳定的传代培养后还会产生一些变异. 11.1.3 动物细胞培养发展历史 1907，美国的哈里森使用盖玻片悬滴培养蛙胚神经组织细胞,开创了动物组织培养的先河. 1923年法国的卡勒尔设计的卡氏培养瓶成功地培养的鸡胚心肌组织. 11.1.3 动物细胞培养发展历史 1951年厄尔利开发了动物细胞体外培养的培养基. 卡瑞乐将无菌技术引入组织培养. 近年来,杂交瘤细胞体外悬浮培养产生单克隆抗体. 11.1.4 生长特性 体外培养的细胞据之生长方式: 1)贴附生长型 细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长. 如人胚肺细胞，Hela细胞，巨噬细胞，神经细胞 据培养细胞的形态: ①成纤维细胞型细胞 细胞贴壁后成梭形,形状大多排列疏松, 有较大的细胞间隙.如人胚肺细胞. ②上皮型细胞 类似于上皮细胞.如Hela细胞(宫颈癌细胞) 注意: 实际情况下,所培养的细胞并不一定期呈现出某一种典型的形态形式,而多呈现一些过度形态. 2)悬浮生长型细胞 非贴附型细胞,常在培养液中悬浮生长. 如血液白细胞，淋巴组织细胞等 ③游走型细胞 细胞在支持物上分散生长、胞质常有伪足和突起伸出、在培养器皿上位置不固定、呈游走和变形运动。如巨噬细胞。 ④多形型细胞 一般分为胞体和突起两部分。此类细胞不常见，如神经元和神经胶质细胞。 11.2 体外培养细胞基本技术 体外培养特点 体外培养工具 体外培养条件 体外细胞生长增殖过程 培养方法 大规模培养技术 11.2.1 体外培养特点 1)营养条件苛刻 除一般的营养物质外,还要血清. 2)适应性差, 对环境敏感 包括对PH、溶解氧、二氧化碳等。 3)培养时间长，易污染 主要是生长缓慢;显著的污染是培养基的PH迅速改变. 11.2.2 体外培养工具 空心纤维: 是一种由醋酸纤维素和硝酸纤维素混合物所织成的可透性滤膜,外径1/3----1/4mm. 微球: 直径小、密度大的固体颗粒，常通过搅拌使无悬浮状态的细胞颗粒表面单层生长。 11.2.3 体外培养条件 温度：37度 pH：7.2-7.4 气体：氧，二氧化碳，氮气 营养条件：培养基 需要多种氨基酸，维生素，辅酶，核酸，嘌呤，嘧啶，激素和生长因子，其中多种成分可以由血清提供 关于培养基 1）天然培养基 多为动物体液或组织提取液，主要有血清、鸡胚汁、组织提取液。 常配制成0.5%溶液,偏酸性 2）合成培养基 据细胞种类和生长条件不同而异 合成培养基中常要添加一部分天然培养基.多加入小牛血清 3)无血清培养基 加入适宜的促细胞生长因子,保证细胞的良好生长. 此外,动物细胞培养还必需一些溶液. 如 ①平衡盐水:维持渗透压;调控酸/碱平衡 ②PH调整液:3.7%/5.6%/7.4%NaCO3、HEPES ③0.02%EDTA溶液：对细胞进行非酶性解离 ④抗生素:防止微生物污染 如青-链霉素、卡那霉素等 11.2.4 体外细胞生长增殖过程 原代培养期 细胞活跃，分裂但不旺盛 传代培养期 细胞增殖旺盛，可10-50次增殖 衰退期 细胞基本不增殖，并开始衰退凋亡 11.3 培养方法 1）悬滴培养法 1907年哈里森创立。 2）旋转管培养法 1933-1934盖尔和刘易斯建立 3)灌注小室培养法 1912年伯罗设计 4