过量染锌对PC12细胞和大鼠大脑皮层神经元电压依赖性钾通道的影响-生物学;动物学专业论文.docxVIP

南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 韭丞丞 201 1年5月20 El 非公开学位论文标注说明 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 口限制(≤2年) 口秘密(≤lO年) 口机密(≤20年) 保密期限 20 年 月 日至20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 限制★2年(最长2年，可少于2年) 秘密★10年(最长5年，可少于5年) 机密★20年(最长10年，可少于10年) 摘要锌离子(Zn2+)是机体重要的功能因子，具有广泛的生理功能。近年来的 摘要 锌离子(Zn2+)是机体重要的功能因子，具有广泛的生理功能。近年来的 研究资料认为ZIl2+的大量释放与缺血性脑卒中致神经死亡有关。本文主要采用 培养的PCI2细胞和大鼠大脑皮层神经元，通过体外实验观测过量锌对神经细胞 钾通道电流的影响，以及特异性的锌离子螯合剂(TPEN)的逆转效应。以探讨 锌离子在缺血性脑卒中发生过程中的病理生理学意义及其螯合剂TPEN对缺血 性脑卒中的保护作用与机理。 1．不同浓度锌离子对培养的PCI2细胞生长状况的影响：在培养的PCI2细 胞外液中分别加入不同浓度(20pmol／L，40pmol／L，60pmol／L，80pmol／L， 100pmol／L)的锌离子，24小时后观测其对细胞生长状态的影响。结果：20、 40pmol／L的锌对PCI2细胞的作用不明显；60pmol／L的锌作用下，细胞开始发 生异常，细胞形态皱缩、部分突起消失、折光率发生改变等；80pmol／L的锌作 用下此现象更加明显且存活率锐减，已观察到有死亡细胞漂浮于培养基中： 100pmol／L的锌则使PCI2细胞突起完全消失，存活率低于30％。结论：高浓度 锌会导致细胞生长异常，甚至造成凋亡和坏死，且浓度越高这种作用会越明显。 2．TPEN对染锌的PCI2细胞生长状况的影响：在培养的PCI2细胞外液中 分别加入不同浓度的锌离子， 6小时后再分别加入等量的TPEN，24小时后观 测其对细胞生长状态的影响。结果：加入TPEN后，80pmol／L和100pmol／L加 锌组细胞的生长状况有显著改善；而对于40和60pmol／L力I锌组的改变却不明显； 对于低浓度的锌处理组(209mol／L)反而使其细胞存活率有所下降。结论：加入 锌离子螯合剂TPEN会对高浓度锌离子引起的细胞损伤状况有所缓解和改善。 3．不同浓度锌离子对培养的PCI2细胞钾通道电流的影响：在培养的PCI2 细胞外液中分别加入不同浓度的锌离子，6小时后加入TPEN，24小时后观测锌 和TPEN对细胞钾通道电流的影响。结果：1)401unol／L的锌离子和60pmol／L的 锌离子均会使外向延迟整流型钾电流密度增大，尤其是加入60pmol／L的锌离子 后，在激活电压+80 mV时的电流密度显著性增大。在含有40pmol／L的锌离子 和60pmol／L的锌离子的细胞外液中加入TPEN后，钾通道电流密度明显下降。 21 809mol／L的锌离子会使外向延迟整流型钾电流密度减小，瞬时外向钾电流增 大，加入锌离子螯合剂TPEN后，外向延迟整流型钾电流增大，瞬时外向钾电 摘要流基本无变化。结论：1)锌离子对电压依赖性钾通道的影响可能主要是通过延 摘要 流基本无变化。结论：1)锌离子对电压依赖性钾通道的影响可能主要是通过延 整流型钾通道来实现的；2)过量锌会影响外向延迟整流型钾通道电流的变化， 管是增加(40mnol／L和60vmol／L)还是减小(801maol／L)，都会造成钾离子 态平衡紊乱，影响细胞生存环境，扰乱神经细胞的电生理功能，不利于细胞 存，进而造成细胞死亡；3)锌离子螯合剂TPEN可在一定程度上缓解锌对外向 迟整流型钾离子通道造成的影响，起到一定的保护作用。 4．不同浓度锌离子对培养的大脑皮层神经元钾通道电流的影响：在培养的 大脑皮层神经元外液中分别加入不同浓度的锌离子，6d时后加入等量TPEN， 24d,时后观测锌和TPEN对细胞钾通道电流的影响。结果：1)60I．tmol／L的锌离子 和80p．mol／L的锌离子均会使外向延迟整流