07遗传变异-3菌种保藏.pptVIP

第八章 微生物的遗传变异与育种 第四节 菌种的衰退、复壮与保藏 菌种的复壮措施： ①纯种分离法 ②通过宿主体复壮 ③淘汰已衰退的个体 二、菌种保藏 1.目的： ①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种 2.原理： 挑选典型菌种或典型培养物的优良纯种，最好保藏它们的休眠体； 创造一个有利于它们长期休眠的良好环境条件。 措施 低温 干燥 缺氧 避光 缺乏营养 添加保护剂 添加酸度中和剂 （1）斜面保藏法 方法：接种适宜斜面培养基→培养→4℃保藏 措施：低温，4℃ 适用：各大类 保藏期：1~6个月，定时传代 用橡皮塞代替棉塞，可适当延长保藏时间 （2）石蜡油封藏法 方法：斜面或半固体接种 → 培养 → 加无菌液体石蜡高出培养基1cm→4~15℃保藏 措施：低温，隔氧 适用：不能利用石油的各大类 保藏期：1~2年 优点：简便 （3）砂土管保藏法 方法：孢子或芽孢悬液 → 加入无菌砂土管中→ 干燥→ 封口 → 保藏 措施：无营养，缺氧，干燥 适用：产孢子（芽孢）微生物 保藏期：1~10年 （4）冷冻真空干燥保藏 方法：菌种培养 → 用保护剂悬浮 → 加入安瓿管中→低温冻结（-25～-40℃）→抽真空干燥 → 真空封口 → 检查真空度 → 保藏 措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂 保藏期：5~15年或更长 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最理想的保藏方法。 （5）甘油悬液低温冷冻保藏法 方法：菌种培养 → 15~30%甘油培养液悬浮 → 加入保藏管中 → 置 -80℃冰箱保藏 措施：低温（-80℃）、保护剂（15~50%甘油） 适用：细菌、酵母菌 保藏期：约10年 （6）液氮保藏法 方法：菌种培养 → 保护剂悬浮 → 加入保藏管中 → 置液氮瓶中 措施：超低温（-196℃）、保护剂 保藏期：15年 适用于各种微生物，是防止菌种退化最有效的保藏方法。 思考题 名词解释： 遗传、遗传型、表型、变异、饰变、基因重组、转化、转导、接合、原生质体融合、衰退、复壮、质粒 核酸存在的七个水平为哪些？ 典型质粒的种类。 基因突变的机制有哪些？ 7种常用菌种保藏方法的比较。 * * * * * * 一、菌种的衰退与复壮 1.衰退（degeneration）：是指由于自发突变的结果，而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 具体表现有： 原有形态性状变得不典型； 生长速度变慢，产生孢子变少； 对外界不良条件的抵抗能力下降； 代谢产物生产能力下降； 致病菌对宿主侵染力下降。 衰退的防止  ①控制传代次数 ②创造良好的培养条件 ③利用不易衰退的细胞传代 ④采用有效的菌种保藏方法 2.复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复壮：是一种消极的措施，是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。广义的复壮：是一项积极的措施，即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。 平板表面涂布法 平板划线分离法 琼脂培养基浇注法 用“分离小室”进行单细胞分离 用显微操纵器进行单细胞分离 用菌丝尖端切割法进行单细胞分离 菌落纯 （菌种纯） 细胞纯 （菌株纯） 纯种分离法 C2: C3: C4: C1: first set of streaks 划线接种，分离纯化 Inoculating an agar plate to obtain single colonies 3.菌种保藏的方法 菌种保藏机构的任务： 广泛收集实验室和生产用菌种、菌株、病毒毒株的基础上，将它们妥善保藏，使之不死、不衰、不乱，以达到便于研究、交换和使用的目的。 国内外菌种保藏机构 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCM) 中国典型培养物保藏中心（CCTCC） 美国典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 美国北部地区研究实验室（NRRL） 国家水生动植物病原库（APCCAM） * * *