肌酸激酶同工酶MB评估.docVIP

肌酸激酶同工酶——MB评估 上海仁济医院检验科 肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）是由M和B亚基构成的杂化型二聚体，主要存在于心肌细胞的外浆层，是心肌酶谱中最有特异性的酶，从80年代起公认为心肌酶学诊断的“金标准”，应用于急性心肌梗塞（AMI）的早期诊断[1，2]1979年Gerhardt[3]等人首次报道用免疫抑制原理测定CK同工酶，免疫抑制法以其快速、灵敏、定量且可进行自动分析等优点适合常规检测，随着方法与试剂不断改进与完善，1986年国外已有试剂盒供应，但价格昂贵；最近国内研制成功免疫抑制法测CK-MB的试剂盒，本文旨在对该试剂盒的特性作一评估。 材料和方法 一、标本来源 分正常组，AMI组和非AMI组，非常人血清来自体检健康人员，计30例，AMI组53例，系仁济医院心内科病房已确诊为AMI者，非AMI组系心内科及其它科门诊病人，因胸痛、心率失常等初诊疑拟AMI，后经系列观察和酶学检查证实不是AMI患者，共20例。 血标本留取后及时分离血清检测或将检测血清置于-20度冰箱保存至测定。 二、试剂 1. 免疫抑制法检测CK-MB试剂盒：上海北加生化试剂有限公司产品 （1） R1：含CK-MB抗体的咪唑缓冲液 （羊抗人CK-M多克隆抗体抑制剂2000U/L，100mmol/L的咪唑缓冲液成pH6.7内含葡萄糖20mmol/L，醋酸镁10mmol/L，EDTA 2mmol/L） （2） R2(A)：酶干粉。 （AMP 5mmol/L，磷酸肌酸 30mmol/L，五磷酸二腺苷 10mmol/L，NADP 2mmol/L，V-乙腺半胱氨酸 20mmol/L，已糖激酶≥2500U/L，G6PDH≥500U/L，ADP 2mmol/L）。 2. 宝灵曼CK-MB试剂盒：对照用。 三、仪器 HITACHI 7150型自动生化分析仪 波长=340nm 四、方法 本试验在日立7150生化自动分析仪器上测定，参数表如下： TEST ASSAY CODE SAMPLE VOLUME R1 VOLUME R2 VOLUME WAVELENGTH CALIB METHOD STD. (1) CONC. –POSZ. STD. (2) CONC. –POSZ. STD. (3) CONC. –POSZ. STD. (4) CONC. –POSZ. STD. (5) CONC. –POSZ. STD. (6) CONC. –POSZ. SD LIMIT DUPLICATE LIMIT SENSITIVITY LIMIT SENSITIVITY LIMIT ABS. LIMIT (INC/DEC) PROZONE LIMIT EXPECTED VALUE TECH LIMIT INSTRUMENT FACTOR [ CK-MB ] [ RATE - A ]:[ 45 ]-[ 50 ] [ 5 ][ 3 ] [ 240 ][ 100 ][ NO ] [60 ][ 20 ][ NO ] [ ][ 340 ] [ LINEAR ][ 0 ][ 0 ] [ 0.0 ]-[ 1 ] [ 65 ]-[ 28 ] [ 0 ]-‘[ 0 ] [ 0 ]-‘[ 0 ] [ 0 ]-‘[ 0 ] [ 0 ]-‘[ 0 ] [ 0.1 ] [ 100 ] [ 100 ] [ 0 ] [ 9000 ][ INCREASE ] [ 0 ][ LOWER ] [ 0 ]-[ 25 ] [ 100]-[ 1000] [ 1.0 ] 结 果 一、线性范围 取一高活性CK-MB标本：152.0U/L用生理盐水按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5比例稀释，测得其相应活性分别为38.0、81.0、111.0、131.0、152.0，作图（见图1）。呈典型的抛物线曲线，符合免疫比浊法反应原理。 图1 试剂盒测定CK-MB线性 同样操作方法，将CK-MB为79.0U/L的病人血清标本用生理盐水按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5比例稀释，测得相应活性为18.7、32.5、48.9、65.5、79.0以稀释倍数为X轴，酶活性Y为轴，其线性见图2，可见CK-MB活性在80U/L以下线性良好。 图2 试剂盒测定CK-MB线性 二、精密度试验 分别取低、中、高活性的血清标本（简称低值、中值、高值）。按本法操作，批内重复200次，批间是每天测定一次共10天，表1为本试剂盒对五份血清标本所做的重复性试验，批内：n=60，CV=1.66~13.66%，平均6.78%。批间：n=20，CV=6.59~11.73%，平均9.16%，基本符合质控要求，显示该试剂盒有效较高的精密度。 表1