病生课程调亡r.pptVIP

* 核dDNA在核小体连接处断裂成核小体片段，井向核膜下或中央部异染色质区聚集形成浓缩的染色质块，在电镜下呈高电子密度。凋亡细胞中染色质块聚集于核膜下，称边聚；或聚集于核中央部，称中聚。染色质聚集部以外的低电子密度区为透明区，是由于核孔变大从而导致其通透性增大，细胞质中水分不断渗入而造成。随着染色质进一步聚集，核纤维层断裂消失，核膜在核膜孔处断裂，两断裂端向内包裹将聚集的染色质块分割，形成若干个核碎片。 * 透射电镜观察软骨细胞凋亡的结果 利用透视电镜，能清楚地观察到细胞结构在凋亡不同时期的变化如细胞体积变小,细胞质浓缩,,细胞膜起泡、出芽、形成凋亡小体。 透视电镜形态学观察是目前判断凋亡最经典、最可靠的方法，被认为是确定细胞凋亡的金标准。但形态学检测方法最大的局限性是只能定性,不能有效定量, 且不适用于大批标本的检测.故常作为其他检测方法的基础。 * 由于caspase蛋白水解酶的作用，使细胞骨架断裂， * 通过识别膜外新的生物大分子PS并吞噬和消化。整个凋亡过程没有细胞内容物的外漏，因而不伴有局部的炎症反应，也无纤维化现象。 尽管细胞裂解为多个凋亡小体，但小体仍然有膜包绕，其溶酶体、线粒体、细胞膜结构完好，维持着内外渗透压梯度的平衡和密封状态，因此 不存在细胞内容物的外溢现象，因而也不引起组织的炎症反应。 通常情况下，凋亡过程进行速度很快，凋亡小体被清除的速度也很快，因此，想要全面地从形态上检测和观察上述凋亡细胞的变化往往比较困难，在研究细胞凋亡时，更多采用的是对凋亡细胞生化特征进行观察。 * 细胞凋亡时发生的形态学变化特征比较明显，这些特征是检测的依据 细胞凋亡早期形态学改变是细胞皱缩，核染色质浓聚、固缩,聚集在核膜周边,然后是继而细胞核裂破碎，细胞膜起泡,出芽， 包裹胞质和染色质断片, 形成多个膜结构尚完整的“小泡”及“凋亡小体，凋亡小体形成后迅速悲临近细胞吞噬、消化。整个凋亡过程没有细胞内容务的外露，因而不伴有局部炎症反应 的 * 组成染色质的基本结构单位是核小体， DNA链上每隔200个核苷酸就有1个核小体,核小体之间的连接区易受核酸内切酶的攻击而发生断裂，细胞凋亡时，内源性核酸内切酶被激活，在核小体连接区切开DNA，形成180-200BP或其整数倍的片断，这些片断在琼脂糖凝胶电泳中可呈特征性的梯状条带，而坏死细胞的DNA是被随机破坏的，电泳时出现类似血涂片的连续性改变。 * 组成染色质的基本结构单位是核小体， DNA链上每隔200个核苷酸就有1个核小体,核小体之间的连接区易受核酸内切酶的攻击而发生断裂，细胞凋亡时，内源性核酸内切酶被激活，在核小体连接区切开DNA，形成180-200BP或其整数倍的片断，这些片断在琼脂糖凝胶电泳中可呈特征性的梯状条带，而坏死细胞的DNA是被随机破坏的，电泳时出现类似血涂片的连续性改变。 * 是一组对底物天冬氨酸部位有特异水解作用，其活性中心富含半胱氨酸的蛋白酶。 在细胞内的存在形式：蛋白酶原，用Procaspase表示。 结构：相似的氨基酸序列、结构和底物特异性，酶原有三个结构域（一个NH2末端结构域、20Kd大亚基和10Kd小亚基各一个）。 * Caspase的活化是有顺序的多步水解的过程，虽然分子各异，但是它们活化的过程相似。 首先在caspase前体的N-端前肽和大亚基之间的特定位点被水解去除N-端前肽，然后再在大小亚基之间切割释放大小亚基，并进而形成两两组成的有活性的四聚体, * 起始caspas是通过趋近诱导原理(induced proximity)被激活的。死亡受体被死亡信号激活后,可与连接器FADD(Fa-associated death domain)和aspase-8前体结合导致在局部形成高浓度的procaspase-8,而procas-pase-8通过其自身催化作用活化本身[6]。 起始型caspase的激活不仅需要凋亡信号还需与各种特异的协同因子结合后,才能对前体caspase进行结构修饰。caspase-8前体的激活需要通过它的DED(death effect domain)与协同因子FADD结合。caspase-9前体的激活也需要通过其CARD与协同因子Apaf-1、cyto C和dATP结合。 协同因子是如何激活caspase的呢?虽然caspase前体的基因结构还不很清楚,但是现在基本认为协同因子与caspase前体之间有两种可能的相互作用模式:①caspase在细胞中的前体含量很低,但仍可探测到它的活性,而且它们都是通过形成二聚体而激活下游caspase的。所以有人认为caspase是以低浓度的单聚体形式存在于细胞内,而协同因子能使caspase前体之间发生聚集,从而使分子内的自身水解作用被激活。②另外有 人认