蛋白质含量的测定(二)——紫外吸收法.pptVIP

蛋白质的含量测定（二） ——紫外吸收法;一、实验目的 学习756型紫外分光光度计的操作 学习紫外吸收法测定蛋白质含量的原理和方法;二、实验原理 蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm 在一定波长处，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度成正比，因此可以进行蛋白质含量的测定 紫外吸收法的优点：简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用；低浓度的盐和大多数缓冲液都不干扰测定，适合柱层析洗脱液的快速连续检测 紫外吸收法的缺点：准确度较差，干扰物质多；在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差；样品中若含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰；测定时受样品的pH影响较大;四种紫外吸收法 280nm的光吸收法：因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收，且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光值是最常用的紫外吸收法 280nm和260nm的吸收差法 215nm和225nm的吸收差法：蛋白质的稀溶液由于含量低而不能用280nm的光吸收法测定时，可用245nm与225nm吸收值之差，通过标准曲线来测定蛋白质稀溶液的浓度 肽键测定法：蛋白质溶液在238nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比;三、实验器材 试管及试管架 移液管 756型紫外分光光度计;四、实验材料与试剂 蛋白标准液（1.0mg/mL） 稀释血清;五、实验操作 制作标准曲线 取8支试管，按下表操作混匀，选用石英比色杯，在280nm波长处分别测定各管溶液的吸光值;血清蛋白质吸光值的测定：准确吸取1mL血清，加入3mL蒸馏水，混匀，测定280nm波长处的吸光值 血清蛋白质含量的计算：利用标准曲线，根据血清蛋白测定的吸光值求出相应的蛋白含量，注意稀释倍数;六、实验思考 紫外吸收法测定蛋白质含量的原理是什么？ 紫外吸收法测定蛋白质含量的优缺点有哪些？;INSERT THE TITLE OF YOUR PRESENTATION HERE ;Free PPT Templates - Widescreen(16:9);Click to add title;INSERT THE TITLE OF YOUR PRESENTATION HERE ;Free PPT Templates - Widescreen(16:9);Click to add title