环境微生物学实验研究.pptVIP

一、实验目的 了解大肠菌群的检测方法。 二、材料与器皿 (—)培养基 1、普通乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 1.6％溴甲酚紫乙醇液 1.0mL 蒸馏水 1000mL pH 7.2~7.4 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4，再加入1.6％溴甲酚紫乙醇液1.0mL，充分混匀，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管10mL，115℃灭菌20min。 2、三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 按上述普通乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管5mL。 3、品红亚硫酸钠培养基（供平板分离用） 蛋白胨 10g 乳糖 10g K2HPO4 3.5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000mL 无水亚硫酸钠 5g左右 5％的碱性品红乙醇溶液 20mL pH 7.2~7.4 4、伊红美蓝培养基（EMB培养基）（供发酵法平板分离用，3和4可任选一种） 蛋白胨 10g 乳糖 10g K2HPO4 2.0g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 2％伊红（曙红）水溶液 20mL 5％美蓝（亚甲蓝）水溶液 13mL pH 7.2~7.4 (二)灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染色液、灭菌培养皿。 三、方法与步骤 (一)水样的采集 供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4小时，在0～4℃下保存不应超过24小时，如不能在4小时内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。 （1）自来水取样：应在水龙头打开放水5分钟，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。 江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。 （二）初发酵试验 水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液；再从10-1制备10-2稀释液。以此类推，稀释到所需倍数。 ?（2）接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基（接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡）中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL， 小心混匀放入37℃培养箱中培养24小时。此即5管法。 （3） 结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体（杜汉氏小管内有无气体）和酸产生（培养基有无变色）。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。 若实验所测定的1