大肠杆菌CRISPR-Cas9系统基因敲除简介.docxVIP

--专业文档-可编辑-- -- 1 CRISPR-Cas系统的研究进展 CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats) ，即串联的、间隔的短回文重复序列， 最早在 1987 年研究大肠杆菌的碱性磷酸酶基因时被发现 [1] 。随后在细菌和古细菌的基因组中也发现大量存 在 CRISPR，研究证实它能够保护自身抵御外来病毒和质粒的入侵 [2] ，作用机制是依靠 crRNA(CRISPR RNA) 和 tracrRNA(trans-activating crRNA) 结合并引导 Cas 蛋白对外源 DNA 进行特异性降解 [3] 。已发现的 CRISPR-Cas 系统有三种类型： Ⅰ型， Ⅱ型和Ⅲ型， 其中以Ⅱ型最为简单， 只需一种 Cas 蛋白，即通过 RNA 介导核心蛋白 Cas9 识别并切割靶序列，引起 DNA 双链断裂 [2] 。 受自然界中 CRISPR-Cas 系统的启发，主要对来自于化脓性链球菌 (Streptococcus pyogenes) 的Ⅱ型 CRISPR-Cas 系统进行人为改造和利用，目前已经将其发展成为一种新型的基因编辑技术，实现基因敲除、 插入、定点突变和组合编辑 [4]，并成功应用于大肠杆菌、酿酒酵母、家蚕、果蝇和人类细胞等 [5] 。和传统 的基因编辑技术相