(整理)生物：《基因工程的基本操作程序》ppt_11.pptVIP

PCR技术扩增与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 （三）人工合成法 DNA合成仪 推测 推测 合成 1、前提：基因比较小、核苷酸序列已知 蛋白质的氨基酸顺序 mRNA核苷酸序列 基因DNA的核苷酸序列 目的 基因 （序列已知） 2、方法：通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因 3、过程： 1、如果不知道目的基因的核苷酸序列，可采用_________________ 总结：获取目的基因的三种方法应用 1、如果知道目的基因两端的核苷酸序列，而且基因比较大，可采用____________ 2、如果知道目的基因的序列，而且基因比较小，可采用________________ PCR技术扩增 化学方法人工合成 从基因文库获取的方法 方法 基因文库的构建 PCR技术扩增 人工合成 基因组文库 部分基因文库 （如cDNA文库） 优点 操作简单 专一性 可在短时间内大量扩增目的基因 专一性强，可产生自然界中不存在的新基因 缺点 工作量大、盲目性大、专一性差 操作过程较麻烦、技术要求过高 需要严格控制温度，技术要求高 适用范围小 提取目的基因的方法与比较 1、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应 2、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ A D 3、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 ①双链DNA分子为模板 ②ATGTG或TACAC模板链 ③四种脱氧核苷酸 ④四种核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物 ⑧温度变化 ⑨恒温 A．①③④⑦⑨ B．①④⑥⑦⑧ C．②⑤⑥⑦⑨ D．①③⑥⑦⑧ D 4、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是 A.540个 B.8100个 C.17280个 D.7560个 B 二：基因表达载体的构建——基因工程的核心 1 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2 组成： 目的基因+启动子+终止子 +标记基因等 2.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 调节基 因 操纵基 因 结构基因 RNA聚合酶 半乳糖苷酶 酶 酶 RNA聚合酶 启动子 RNA聚合酶 启动子：位于基因首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。 思考1：表达载体为什么一定要有启动子？ （1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能有利于基因的表达； （2）通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体细胞无法转录。 思考2：终止子的作用是什么？ 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。 是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。 思考3：标记基因有什么作用？ ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 注意 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少。 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 3.基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 四个黏性末端 DNA连接酶 基因表达载体 （重组DNA分子或重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 跟踪训练　(2012年江苏无锡高二检测)如图为基因表达载体的模式图，下列有关基因工程中载体的说法错误的是(