广谱基质金属蛋白酶抑制剂多西环素对高血压大鼠主动脉结构的影响-内科学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士研究生学位论文 天津医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 广谱基质金属蛋白酶抑制剂多西环素对高血压大鼠 主动脉结构的影响 摘要 目的：大动脉硬化是高血压发展过程中的增龄性改变之一。弹力蛋白和胶原是动 脉壁的两种主要成分，其正常代谢受多种酶系调控，其中最重要的是基质金属蛋 白酶(Matrix Metalloproteinases，MMVs)系统。有研究显示，在高血压的发展中， 主动脉中的MMPs活性增加；但其与高血压主动脉重塑的关系尚无定论。动脉 瘤是血管的一种外向性重塑；近来的研究显示MMPs的活性增高是动脉瘤发展 乃至破裂的重要原因；相反，应用非特异性MMP$抑制剂(多西环素)可以有 效延缓动脉瘤体的进行性增大。因此，本研究旨在利用多西环素的非特异性 MMPs抑制剂特性，研究该药对高血压性主动脉重塑的影响。 方法：80只7周龄雄性卒中易感型自发性高血压大g(Stroke-Prone Spontaneously Hypertensive Rats，SHR-SPs)随机分为药物干预组和对照组，每组40只，阴性对 照采用同周龄雄性WKY大鼠(Wistar-Kyoto Rats，WKY)。药物干预组每天经自 由饮水给予多西环素(Doxycyeline，DOX,30 mg·Kgqday。1)，经去离子水溶解，每 周按体重变化调整饮水量；对照组每日给予等量去离子水。干预期间定期观察大 鼠体重、无创尾压。当对照组病死率达到50％时，观察终止．取主动脉于液氮速 冻后保存于-80℃中，一部分组织用于制备石蜡切片并进行苏木素．伊红 (Hematoxylin and Eosin,HE)、维多利亚蓝(Victoria Blue，弹力纤维特异性染色) 和vo,n Kossa银(异常钙沉积染色)病理染色，另一部分组织用于交联胶原测定、 Gelatin Zymography、Western Blot分析。病理图像经数字CCD扫描后，用图像 分析软件计算血管内、外膜周长、血管中膜面积、弹力纤维占中膜面积百分比、 钙沉积占中膜面积百分比。 丕堡堕型盔兰堡主婴塞竺堂垡堡窒 丕堡堕型盔兰堡主婴塞竺堂垡堡窒 主苎塑墨 结果： 1．Gelatin Zymography和Western Blot分析显示多西环素可以抑制主动脉 MMP．2和MMP一9的活性，但对MMP．2的蛋白表达水平无明显影响。Gelatin Zymography分析结果显示：与对照组比较，DOX组MMP．2和MMP．9的活性均 显著降低(MMP．2：3．154-0．23 VS．2．434-0．14，P0。05；MMP．9：14．14-I．50 vs． 9．71士1．31，P0．05)。Western Blot分析：与对照组比较，DOX组MMP．2的蛋白 表达水平无统计学差异(0．6254-0．194 VS．O．5764-0．165，P0．05)。 2．维多利亚蓝染色病理图像分析；对照组的主动脉弹力纤维占中膜面积百 分比较WKY组升高[(5．72-土3．87)％VS．(2．1蚴．997)％，P0．05】。与对照组比较， DOX组弹力纤维占中膜面积百分比显著降低【(5．724-3．8D％vs．(3．46M．62)％， PO．05]。 3．交联胶原浓度测定：对照组、DOX组主动脉交联胶原浓度均较WKY组 显著降]ff,(28．04-8．711．tg／mg,26．4士6．981．tg／mg vs．55．2士13．3¨,g／mg,PO．05)。对照组与 DOX组交联胶原浓度无统计学差异(28．o士8．711．tg／mg vs．26．44-6．98pg／mg, PO．05)。 4．yon Kossa银染色病理图像分析：对照组、DOX组主动脉钙沉积占中膜面 积百分比均较WKY组明显升高【(O．960--t：0．999)％，(O．6884-0．71 8)％vs． (o．232士0．237)％，P0．05]。与对照组比较，DOX组钙沉积占中膜面积百分比虽无 统计学差异，但存在降低的趋势[(O．9604-0．999)％VS．(0．6884-0．718)％，P=-0．177]。 5．各组间主动脉内膜周长、外膜周长和血管中膜面积无明显差异：对照组、 WKY、DOX组间内膜周长无统计学差异(6322．44-640．21maVS．6127．44-331．1pmVS． 6294．44-271．6pm，P0．05)。对照组、DOX组的外膜周长较WKY组存在增大的趋 势(7418．94-786．2岫7434．04-392．2pm VS．6952．3士493．1lxm，P=0．132，P=0．121， respectively)。对照组和DOX组外膜周长无统计学差异(7418．94-786．29m v