野生型的SV40病毒颗粒的包装范围相当严格.PPTVIP

质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多，因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆，然后再引入真核细胞。动物病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一，目前病毒载体常用者有改造来自猴肾病毒SV40（Simian Virus 40）、逆转录病毒和昆虫杆状病毒等，使用这些病毒载体的目的多为将目的基因或序列放入动物细胞中表达或试验其功能、或作基因治疗等。 SV40(Simian vacuolating virus 40 or Simian virus 40)是猴空泡病毒40，猿猴病毒40或猴病毒40的缩写,多瘤病毒科，这是在人类和猴子都发现的致瘤病毒。 1960年，科学家首次在猴子体内发现了SV40。随后，科学家又在脊髓灰质炎试剂中发现了SV40，其原因是实验室在培养疫苗时使用了从猴子体内分离出的肾脏细胞。 SV40病毒的基因组是一种环形双链的DNA，基因组5.2kb，病毒的直径45nm，病毒成熟部位细胞核，无被膜，72个核壳粒亚单位，这种大小很适于基因操作。同时它也是第一个完成基因组DNA全序列分析的动物病毒。 由于SV40结构简单，被首先应用于真核生物复制的研究。增强子首先发现于SV40基因组内。 猿猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus 40，SV40）载体的发展速度，远远超过了其它动物病毒载体，其主要原因在于，目前有关该病毒的分子生物学知识已有了相当明显的进步，它是迄今为止研究得最为详尽的乳多空病毒之一。SV40病毒的基因组是一种环形双链的DNA，比较小，很适于基因操作。同时它也是第一个完成基因组DNA全序列分析的动物病毒，而且对其复制及转录方面的特性也有了相当深刻的了解。这些都为发展SV40病毒作为基因克隆的载体奠定了很好的基础。 野生型的SV40病毒颗粒的包装范围相当严格，超过其基因组大小（5.2kb）的重组DNA就不能够被包装为成熟的病毒颗粒。而且，SV40病毒还存在着寄主细胞的局限性，它只能在受体细胞中增殖，并最终导致寄主细胞的死亡，这样就不能作长期的培养使用。因此，野生型的SV40病毒必须经过改造之后，才能发展成为基因克隆的有用载体。针对这种情况，目前设计的以SV40病毒为基础的基因克隆载体，主要有2种不同的类型。 取代型的重组病毒载体（recombnant virus vector）。在这种类型的载体中，外源DNA是直接插入在缺陷性的病毒基因组。由于插入的外源DNA片段在大小上与被取代的病毒基因组区段是等同的，因此形成的重组体DNA能够在哺乳动物的受体细胞中增殖，并被包装成病毒颗粒。但为了补充这段被取代的病毒基因组DNA的功能，必须使用一种与之互补的辅助病毒。 重组的病毒-质粒载体（recombinant viral plasmid vector）。在这类载体中，病毒基因组部分只保留下维持在哺乳动物细胞中进行复制所必须的有关序列，但它融合上了一个细菌质粒，因而还能够在大肠杆菌细胞中进行复制和增殖。不过这种重组体分子没有被包装成病毒颗粒，不会出现裂解感染的情况，它实际上是一种类似于质粒的DNA分子载体。 杆状病毒的生物学特性 杆状病毒只来源于无脊椎动物，虽然已发现600多种杆状病毒，但进行分子生物学研究的不到20种。杆状病毒的基因组为单一闭合环状双链DNA分子，大小为80～160 kb，其基因组可在昆虫细胞核复制和转录。DNA复制后组装在杆状病毒的核衣内，后者具有较大的柔韧性，可容纳 较大片段的外源DNA插入，因此是表达大片段DNA的理想载体。其中，用作外源基因表达载体的杆状病毒，目前仅限于核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus，NPV)。该病毒颗粒在细胞内可由多角体蛋白包裹形成长度约1~5 m的包含体病毒，呈多角体形状。核型多角体病毒有两种形式：一种为包含体病毒(occluded virus，OV)，另一种则为细胞外芽生病毒(budded virus，BV)。它们在病毒感染中扮演的角色不同，包含体病毒是昆虫间水平感染的病毒形式，昆虫往往是食入污染OV的食物后引起感染。包含体病毒外层裹了一层蛋白晶体，即为29 000的多角体蛋白，它对病毒的水平感染起以下作用：①保护病毒颗粒在外界传播过程中免遭环境因素的破坏而失活。②保证病毒颗粒在适当的位置释放，引起感染。 生命科技学院 1610130202 白珊 猿猴空泡病毒 上述这２种类型的载体，都只能短时间地保留在寄主细胞中，供作瞬时表达研究之用，因为最终都会导致寄主细胞的裂解死亡。 反转录病毒（retroviru