GMS-胺银-真菌.docVIP

GMS – 六胺银- GROCOTTS改良法 目的：鉴别真菌。 原理：真菌细胞壁的粘多糖成分被氧化形成醛基。醛基与硝酸银反应，再将银还原成可见的金属形式。 对照：含有真菌的组织。由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。 固定：10%甲醛 技术：4-5m石蜡切片。 设备：酸清洗玻璃器皿，染色缸，微波炉。 试剂： 2% 铬酸： 三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm 蒸馏水Distilled water 500.0 ml 混合溶解，保存期6个月。 警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。 1% 偏重亚硫酸钠Sodium Metabisulfite: 偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm 蒸馏水Distilled water 500.0 ml 混合溶解，保存期6个月。 5% 硼砂： 四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，保存期6个月。 六胺银备用液： 3% 六亚甲基四胺Methenamine (四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml 5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml 混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。 警告：腐蚀性，可能致癌。 工作液： 六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml 蒸馏水Distilled water 25.0 ml 5% 硼砂Borax 2.5 ml 使用前新鲜配制，用后丢弃。 0.5%氯化金： 氯化金Gold chloride 0.5 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。 警告：避免接触和吸入。 0.2%亮绿： 亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml 混合溶解。保存期6个月。 警告：避免接触和吸入。 安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。保持所有打开盖的热溶液于通风橱中。避免接触和吸入染料和化学品。 铬酸：对皮肤和粘膜有腐蚀性，高度毒性，影响靶器官为肾。致癌物质。 偏重亚硫酸钠：侵入途径为摄入，能引起胃肠道不适，对皮肤、眼睛和粘膜有刺激性。 硝酸银：剧烈的皮肤和眼睛刺激，氧化剂。摄入将导致严重的胃肠道不适。可能致癌：可疑的肿瘤发生因素。 硫代硫酸钠：摄入毒性。能引起胃刺激，接触对皮肤、眼睛和呼吸系统有刺激性。 亮绿SF Yellowish：可能致癌。 程序： 1. 脱蜡至无水酒精。 2. *2% 铬酸微波高火 45 seconds，放置 5 minutes。 3. 流水冲洗蒸馏水稍洗。 4. 1% 偏重亚硫酸钠温室1 minute。 5. 流水冲洗，蒸馏水稍洗3 changes。 6. *六胺银工作液微波高火70seconds，在热溶液中摇动玻片，直至组织应呈褐纸袋色。 7. 蒸馏水稍洗 2 changes。 8. 0.5% 氯化金1 minute 或直至灰色。 9. 蒸馏水稍洗。 10. 5% Hypo, 3 minutes. 11. 流水冲洗，蒸馏水稍洗。 12. 亮绿液1 minute. 13. 蒸馏水稍洗。 14. 脱水、透明和封固。 *传统方法：5% 铬酸 60°C 水浴 1 hour。 银液： 60°C 水浴 1 hour 结果： 真菌：黑色 背景：绿色 注意： 1.如果铬酸变褐色是需要更换，传统方法5%铬酸胜于2%，高浓度的铬酸容易在微波处理时引起组织掉片。 2. 如果微生物不变黑色，检查： a. 铬酸是否新鲜。 b. 偏重亚硫酸钠是否新鲜。 c. 硼砂是否新鲜f。 3. 如果银液出现混蚀或在染色缸上出现银镜时，重新配制溶液。 参考文献： Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp243-246, Battelle Press Luna L, Manual of Histologic Staining Methods of the AFIP, 3rd Ed,1968, pp 230-231, McGraw-Hill Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech 程序卡 GMS - METHENAMINE SILVER, GROCOTTS, MODIFIED 对照：含有真菌的组织。由曲霉病和肺结核病的组织块是首选